[发明专利]一种用于防治作物镰刀菌病害的绿针假单胞菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物种质资源的开发与利用领域，具体涉及一种用于防治作物镰刀菌病害的绿针假单胞菌及其应用。 

背景技术

镰刀菌（Fusarium）属半知菌亚门真菌，是一类世界性分布的真菌，它不仅可以在土壤中越冬越夏，还可侵染多种植物（粮食作物、经济作物、药用植物及观赏植物），引起植物的穗腐、根腐、茎腐、茎基腐、花腐等多种病害，寄主植物达100余种，侵染寄主植物维管束系统，破坏植物的输导组织维管束，并在生长发育代谢过程中产生毒素危害作物，造成作物萎蔫死亡，影响产量和品质。其中以禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌引起的病害最为严重，给农业生产带来巨大的经济损失。 

禾谷镰孢菌（Fusarium graminearum Schw.），有性态为Gibberella zeae Schw.petch.称玉蜀黍赤霉。该菌能引起田间小麦、大麦等禾本科作物的病害。由禾谷镰孢菌引起的小麦赤霉病菌不仅影响小麦产量，而且其产生的真菌毒素污染产品质量，严重威胁人畜健康。尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）是一种世界性分布的土传病原真菌，寄主范围广泛，可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多种植物枯萎病的发生。镰刀菌引起的小麦赤霉病、茄科（番茄）、瓜类（西瓜）枯萎病，是生产上防治最艰难的重要病害之一。 

目前，农业生产中防治由镰刀菌引起的小麦赤霉病、番茄枯萎病、西瓜枯萎病主要以多菌灵、戊唑醇等化学杀菌剂为主。但是，随着多菌灵等杀菌剂的长期使用已导致使用次数和用药浓度增加，也提高了病原菌产生对杀菌剂的抗性的风险。同时，由于化学杀菌剂的广谱性，大量使用不但破坏了微生态环境，而且导致非靶标抗性。 

相对于化学杀菌剂，生物防治剂和天然产物的使用，尤其是微生物杀菌剂的使用具有更加诱人的前景。一方面微生物是地球上最庞大的生物类 群，具有广泛的生物多样性，还可以通过生物工程技术大幅度提高目标物质的产量，易于实现工业化生产；另一方面，微生物杀菌剂较化学农药更加安全，易降解，合成成本较低。 

假单胞菌是活跃在植物根际的一类微生物，许多菌株有抑制植物病害、促进植株生长的作用，这些具有生防作用的菌株尤以荧光性假单胞菌为主，包括铜绿假单胞菌、致金色假单胞菌、绿针假单胞菌、荧光假单胞菌等。 

虽然很多种假单胞菌都已被开发用于制备微生物杀菌剂，但由于假单胞菌种群即菌株的多样性，不同假单胞菌乃至同一假单胞菌的不同菌株均具有不同的抗菌谱、抗菌活性和抗菌特点，筛选具有不同作用对象的高效假单胞菌生防菌剂仍是现在乃至今后相对长一段时间内各国科研工作关注的课题。 

发明内容

本发明提供了一种绿针假单胞菌，该绿针假单胞菌对由镰刀菌引起的小麦赤霉病的防治效果达60%以上。 

一种绿针假单胞菌，分类命名为绿针假单胞菌（Pseudomonas choloraphis），株号为Pcho01，已于2013年6月18日保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.7729。 

本发明还提供了一种含有所述绿针假单胞菌的生防菌剂。该生防菌剂中，所述绿针假单胞菌的浓度优选为1×10⁹～10¹⁰CFU/mL，更优选为1×10⁹CFU/mL。 

本发明还提供了一种所述生防菌剂的制备方法，包括： 

（1）将所述绿针假单胞菌接种于培养液中培养至培养液OD₆₀₀为0.5～0.8，获得种子液； 

所述培养液可选用LB液体培养基，其配方为：氯化钠10g/L，胰蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，调节pH值为7.0； 

（2）将种子液接种于发酵培养基中扩大培养，调节发酵液中绿针假单胞菌的浓度至1×10⁹～10¹⁰CFU/mL，获得所述生防菌剂。 

其中，所述种子液的接种量优选为1～2%。所述发酵培养基可选用金氏培养液（King’s Broth），其配方为：蛋白胨2g，甘油10g，K₂HPO₄1.5 g，MgSO₄·7H₂O1.5g，琼脂15g，pH7.2，1000mL水。