[发明专利]一种抗蟾皮转胶蛋白-2重组蛋白的鼠抗血清的制备方法在审
| 申请号： | 201310355684.2 | 申请日： | 2013-08-15 |
| 公开（公告）号： | CN103408662A | 公开（公告）日： | 2013-11-27 |
| 发明（设计）人： | 杨仙玉 | 申请（专利权）人： | 浙江农林大学 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C07K16/06 |
| 代理公司： | 杭州浙科专利事务所(普通合伙) 33213 | 代理人： | 吴秉中 |
| 地址： | 311300 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 抗蟾皮转胶 蛋白 重组 血清 制备 方法 | ||
1. 一种抗蟾皮转胶蛋白-2重组蛋白的鼠抗血清的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）将蟾皮转胶蛋白-2重组蛋白与弗氏完全佐剂按照1：1的比例混匀，配置成A剂；再将蟾皮转胶蛋白-2重组蛋白与弗氏不完全佐剂按照1：1的比例混匀，配置成B剂，备用；
2）将小白鼠皮下多点注射45-100ug的A剂，然后正常饲养12-16天，再用B剂皮下注射45-100ug，再正常饲养，以后每隔12-16天注射B剂一次，共注射B剂3-5次，备用；
3）将上述处理后小白鼠直接心脏采血，所得血液于2-6℃下静置10-15h，等血液充分凝聚后，在转速2000-4000rpm下离心25-35min，所得上清液即为鼠抗血清，置于-60-70℃超低温冰箱保存即可；
所述的蟾皮转胶蛋白-2重组蛋白采用以下方法制备：
1）从蟾蜍皮肤cDNA质粒文库筛选，克隆到缺失部分5′-端开放阅读框碱基序列的蟾皮转胶蛋白-2重组蛋白 cDNA；
2）在原核表达系统一一大肠肝菌中表达和生产蟾皮转胶蛋白-2重组蛋白: 首先构建工程菌并诱导表达，然后高密度发酵工程菌并诱导表达，包涵体分离和洗涤后，将目的蛋白质复性、纯化。
2. 如权利要求1所述的一种抗蟾皮转胶蛋白-2重组蛋白的鼠抗血清的制备方法，其特征在于：小白鼠皮下A剂的注射量为50-80ug，优选60-70 ug。
3. 如权利要求1所述的一种抗蟾皮转胶蛋白-2重组蛋白的鼠抗血清的制备方法，其特征在于：小白鼠注射A剂后正常饲养14-15天，再注射B剂。
4. 如权利要求1所述的一种抗蟾皮转胶蛋白-2重组蛋白的鼠抗血清的制备方法，其特征在于：小白鼠皮下B剂的注射量为50-80ug，优选60-70 ug。
5. 如权利要求1所述的一种抗蟾皮转胶蛋白-2重组蛋白的鼠抗血清的制备方法，其特征在于：小白鼠注射B剂的间隔饲养时间为14-15天。
6. 如权利要求1所述的一种抗蟾皮转胶蛋白-2重组蛋白的鼠抗血清的制备方法，其特征在于：离心转速为2500-3000rpm，离心时间为28-31min。
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