[发明专利]高表达人CXCR7基因的内皮祖细胞及制备方法和应用

权利要求书

1.一种高表达人CXCR7基因的内皮祖细胞的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将人CXCR7基因克隆至腺病毒载体中，得到的重组腺病毒载体与腺病毒骨架质粒重组，经包装细胞包装，得到携带人CXCR7基因的腺病毒；再将该携带人CXCR7基因的腺病毒感染人脐带血来源内皮祖细胞，得到高表达人CXCR7基因的内皮祖细胞。

2.根据权利要求1所述的高表达人CXCR7基因的内皮祖细胞的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）根据人CXCR7基因的序列，设计如下引物：

BglII CXCR7-primer F：5'-TTGAGATCTCGCCTCAGAACGATGGATC-3'；

HindIII CXCR7-primer R：5'-CGTAAGCTTAACAAGTAAACCCGTCCCAGA-3'；

（2）以含有人CXCR7基因的序列为模板，利用引物对BglII CXCR7-primer F和HindIIICXCR7-primer R进行PCR扩增，得到BglII-CXCR7-HindIII序列；

（3）通过BglII限制性内切酶和HindIII限制性内切酶分别双酶切BglII-CXCR7-HindIII序列和腺病毒载体；再将双酶切后的BglII-CXCR7-HindIII序列和腺病毒载体连接，得到重组腺病毒载体；

（4）将步骤（3）得到的重组腺病毒载体与腺病毒骨架质粒同源重组，得到重组腺病毒重组子；

（5）将步骤（4）得到的重组腺病毒重组子通过包装细胞包装，得到携带人CXCR7基因的腺病毒；

（6）将步骤（5）得到的携带人CXCR7基因的腺病毒感染人脐带血来源内皮祖细胞，得到高表达人CXCR7基因的内皮祖细胞。

3.根据权利要求2所述的高表达人CXCR7基因的内皮祖细胞的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述的含有人CXCR7基因的序列通过如下步骤得到：提取人肝癌细胞Hep G2细胞的总RNA，对提取得到的总RNA进行逆转录，得到cDNA；再通过引物对CXCR7-primer F和CXCR7-primer R对cDNA进行PCR扩增，得到含有人CXCR7基因的序列；

CXCR7-primer F：5'-CGCCTCAGAACGATGGATC-3'；

CXCR7-primer R：5'-AACAAGTAAACCCGTCCCAGA-3'。

4.根据权利要求3所述的高表达人CXCR7基因的内皮祖细胞的制备方法，其特征在于：所述的逆转录的具体操作为：1ng总RNA、1μl10pmol/μl的引物oligo(dT)₁₈，加入10μl无RNA酶的水，轻轻混匀后简单离心；65℃孵育5min，冰上冷却后离心；加入5×反应缓冲液4μl，20U/μl的RiboLock RNA酶抑制剂1μl，10mM dNTP混合液2μl，最后加入200U/μl的RevertAid M-MuLV你转录酶1μl；轻轻混匀后，离心；于42℃孵育60min；之后70℃加热5min结束反应。

5.根据权利要求3所述的高表达人CXCR7基因的内皮祖细胞的制备方法，其特征在于：所述的再通过引物对CXCR7-primer F和CXCR7-primer R对cDNA进行PCR扩增的条件为98℃10s、55℃15s、72℃90s，32个循环。

6.根据权利要求2所述的高表达人CXCR7基因的内皮祖细胞的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述的利用引物对BglII CXCR7-primer F和HindIII CXCR7-primer R进行PCR扩增的条件为98℃10s、55℃15s、72℃90s，32个循环。