[发明专利]水稻Os74蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及水稻Os74蛋白及其应用。

背景技术

植物在生长过程中会受到多种病原菌及昆虫的侵害。为此，植物进化出许多防卫机制来抵抗这些病原菌的侵害。其中，抗病基因（Resistance gene）介导的防卫反应是一个重要的防卫机制。近年来，在一系列物种中克隆了许多抗病基因。大多数抗病基因编码的蛋白由核苷酸结合区域（nucleotide-binding region，NB）和C末端的亮氨酸重复区域（leucine-rich repeat，LRR）组成，这种蛋白被称为NB-LRR蛋白。当病原菌存在时，NB-LRR蛋白可以识别病原菌中对应的效应蛋白并激活防卫反应。通常情况下，这些防卫反应伴随着接种点处出现的过敏反应，如活性氧的迸发、病原相关基因（pathogenesis-related genes）的诱导表达以及系统获得抗性（systemic acquired resistance）的建立，这些反应使植物体抗病。因此，植物新抗病基因的发掘，对理解植物和病原菌的相互作用机制及作物的遗传改良具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供水稻Os74蛋白及其应用。

本发明提供的是如下任一物质在提高粳稻的抗病性中的应用：

（1）SEQ ID No.2所示Os74蛋白；

（2）SEQ ID No.2所示Os74蛋白的编码基因；

（3）含有（2）所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

上述应用中，所述抗病性为抗水稻白叶枯病。

上述应用中，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1中自5’末端起第809-3190位核苷酸所示。

干扰载体在降低粳稻的抗病性中的应用也属于本发明的保护范围。

上述应用中，所述干扰载体按照如下方法制备：将SEQ ID No.1中自5’末端起第557-1023位核苷酸所示DNA片段插入出发载体pCDU-d40-IN的Kpn Ⅰ和PmaC Ⅰ位点间，得到中间载体；将SEQ ID No.1中自5’末端起第557-1023位核苷酸所示DNA片段的反向互补片段插入中间载体的Hind Ⅲ和Sma Ⅰ位点间，最终得到干扰载体。

上述应用中，所述pCDU-d40-IN载体按照如下方法制备：

（1）以中花17的基因组为模板，以OW40BKF和OW40SPmR为引物扩增OsWRKY40基因的干涉片段；

（2）将扩增得到的OsWRKY40基因的干涉片段连接pMD-18T，得到pMD18-T-W40-B；

（3）BamH Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切pMD18-T-W40-B，得到基因片段；BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切pUC-Catin，得到载体大片段；将基因片段与载体大片段连接得到重组质粒pUC-40-IN；

（4）BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切pUC-40-IN，得到基因片段；BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切pBS-sk-Ubi载体，得到载体大片段；将基因片段与载体大片段连接得到重组质粒pBS-W40-IN；

（5）以中花17的基因组为模板，以OW40SmF和OW40H3R为引物扩增OsWRKY40基因的干涉片段；

（6）将扩增得到的OsWRKY40基因的干涉片段连接pMD-18T，得到pMD18T-W40-H；

（7）Sma Ⅰ和HindⅢ双酶切pMD18T-W40-H，得到基因片段；Sma Ⅰ和HindⅢ双酶切pCoUbi:Flag-OsERF922载体，得到载体大片段；将基因片段与载体大片段连接，得到重组质粒pCDU-W40；

（8）用EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切pBS-W40-IN，得到基因片段；EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切pCDU-W40，得到载体大片段；将基因片段与载体大片段连接得到重组质粒pCDU-d40-IN。

所述OW40BKF的序列为5’-ATGGATCCGGTACCATGGATCTGATGGGTGG-3’；

所述OW40SPmR的序列为5’-TTGTCGACACGTGGCCGGTGCGGTTCAG-3’；

所述OW40SmF的序列为5’-TACCCGGGATCTGATGGGTGGGTACG-3’；

所述和OW40H3R的序列为5’-GTAAGCTTCAGCATGGAGATCACCTTCTTG-3’；

上述应用中，所述pBS-sk-Ubi载体按照如下方法制备：