[发明专利]离子色谱定性检测壳寡糖的方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种离子色谱定性检测壳寡糖的方法及应用。

背景技术

色谱法最根本的定性指标是组分在色谱柱内的滞留时间即保留时间。保留指数又称柯瓦特指数，它不像保留值那样极大的受实验条件的影响，也不像Vg值要求知道固定液的质量，它还克服了相对保留值定性时只有一个基准物质，在确定保留时间与基准物质的间隔较大的组分时，会产生较大相对误差的问题。目前保留指数通常应用于气相色谱和质谱的辅助定性研究中，至今未见关于将保留值定性方法应用于离子色谱分析物辅助定性方面的文献报道。

对于壳寡糖的定性方法，目前已有薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法等，但这些方法都需要使用标准样品进行验证。而壳寡糖的标准样品不但价格昂贵，且供应商极少因而较难购全。低聚壳寡糖是一类成系列的化合物，实际生产的分析过程中一般也无法购得所有聚合度的壳寡糖标准样品，因而，在实际生产过程中亟待开发一种只需少数几种标准品即可完成对全系列化合物进行定性的方法。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的是提供一种离子色谱定性检测壳寡糖的方法及应用。

一种离子色谱定性检测壳寡糖的方法，利用高效阴离子交换色谱—积分脉冲安培检测法(HPAEC-IPAD)对多种壳寡糖标准样品进行分离，然后用高效阴离子交换色谱—积分脉冲安培检测法相同条件下分离壳寡糖混合物，根据与标准品保留时间对照推断得出壳寡糖混合物中标准样品的分布各峰，计算标准样品的聚合度（DP）与其保留因子（k'）值，并建立关联数学方程，然后计算壳寡糖混合物中未知峰保留因子，把未知峰的保留因子值代入上述的关联数学方程计算出壳寡糖的未知峰的聚合度，从而实现对所述壳寡糖混合物的定性检测。

所述的壳寡糖混合物包括壳寡糖标准样品和未知壳寡糖。

所述的壳寡糖标准样品的聚合度和未知壳寡糖的聚合度不一致。

所述的关联数学方程为线性方程，logk'= alogDP+c, 其中a 为实数参数，c为常数。

色谱条件为85%(V/V)100 mmol/L 氢氧化钠和15%(V/V)水组成的淋洗液进行等度淋洗，流速0.40 mL/min，柱温30℃；检测条件为检测池温度30℃，池内以Au为zz工作电极，Ag-AgCl作参比电极，积分脉冲安培法进行检测。

一种所述的方法，应用于食品安全、生物医药产业中壳寡糖产品的聚合度评价。

 一种所述的方法，当其他系列化合物具有壳寡糖的检测特性时，适用于所述的其他系列化合物的定性检测。

 本发明的有益效果：本发明只需少数几种标准品即可完成对系列化合物定性，可广泛应用于食品安全、生物医药等产业中壳寡糖产品的聚合度评价，参照该法也可建立其他成系列化合物的辅助定性方法。成本低，检测方便准确。

附图说明

图1为壳六糖、壳五糖、壳四糖、壳三糖、壳二糖标准样品色谱图。其中，1-5号峰依次为壳六糖、壳五糖、壳四糖、壳三糖和壳二糖。

图2为壳寡糖混合物样品分离色谱图。

图3为壳寡糖样品的质谱图。

具体实施方式

以下结合附图和实施例对本发明做进一步的说明。

实施例  壳寡糖的色谱分析

具体步骤如下：

1、标准混合液液配制：分别称取壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖、壳六糖的标准物质各10.0000 mg用超纯水分别溶解并于10 mL容量瓶中定容，配成浓度为1.0000 mg/mL的储备液。然后根据样品含量将储备液稀释成标准使用溶液备用。

2、样品前处理：称取混匀的壳寡糖样品2.0g作为试样，用超纯水溶解后定容至20mL，用0.45μm 水性滤膜过滤，滤液备用。

3、色谱条件：

色谱柱系统：DIONEX CarboPac PA10 保护柱 (4.0×50mm) + DIONEX CarboPac PA10 分析柱(4.0×250mm)。

淋洗液：A：100 mmol/L氢氧化钠；B：超纯水；85%A+15%B(V/V) 等度洗脱。

使用以上色谱柱及淋洗液，流速 0.40 mL/min，色谱柱及检测池温度30℃，进样量 25 μL，ED40A电化学检测器配 Au工作电极和Ag-AgCl 参比电极，积分脉冲安培检测。

4、试验分组及分析：

Ⅰ组——壳寡糖标准品混合液色谱分析，见图1，图中峰1=壳六糖，峰2=壳五糖，峰3=壳四糖，峰2=壳三糖，峰1=壳二糖。