[发明专利]一种苯硼酸材料富集糖肽的方法

权利要求书

1.一种苯硼酸材料富集糖肽富集方法，其特征在于：以苯硼酸修饰的硅球为富集材料，进行固相萃取（SPE），于肽样品中富集分离出糖肽。

2.按照权利要求1所述方法，其特征在于：富集材料的粒径是2-50m,孔径为

3.按照权利要求1所述方法，其特征在于：

硅球上修饰的苯硼酸层数是单层或多层；所述单层为一分子苯硼酸通过连接基团结合到硅球上的一分子硅羟基上；所述多层为多分子苯硼酸通过聚合首尾相连结合到硅球上的一分子硅羟基上。

4.按照权利要求1所述方法，其特征在于：

所述富集分离的色谱模式为亲水作用色谱和亲和作用色谱原理；以苯硼酸修饰的硅球作为富集材料，使用固相萃取（SPE）技术，

首先使富集材料与肽样品接触，然后冲洗富集材料去除其上的非糖肽，最后将富集材料上的糖肽洗脱下来；

冲洗非糖肽的流动相组成包括水、有机溶剂和缓冲盐混合液，或水和有机溶剂混合液；

洗脱糖肽的洗脱溶剂组成包括水或水和有机溶剂混合液。

5.按照权利要求4所述方法，其特征在于：

具体操作采用柱固相萃取模式或分散固相萃取模式；

在柱固相萃取(SPE)模式下采用富集材料富集糖肽时，将肽样品上到填装有富集材料的SPE柱上，采用冲洗非糖肽的流动相冲洗富集材料去除其上的非糖肽，再采用洗脱溶剂冲洗，富集出糖肽；

或在分散固相萃取模式下采用富集材料顺序富集磷酸肽时，将肽样品直接与富集材料混合，离心，采用冲洗非糖肽的流动相去除富集材料上的非糖肽；离心，采用洗脱溶剂冲洗富集材料上的，富集出糖肽。

6.按照权利要求5所述方法，其特征在于：分散固相萃取模式下，肽样品与富集材料接触后需要孵化，孵化时间0.5-120分钟。

7.按照权利要求4或5所述方法，其特征在于：

冲洗非糖肽的流动相组成如下a-f任一之一所示：

a.A相为水，B相为乙腈，体积比A/B:10/90-40/60；

b.A相为水，B相为甲醇，体积比A/B:10/90-40/60；

c.A相为碳酸氢铵水溶液，B相为乙腈，体积比A/B:5/95-40/60；

d.A相为碳酸氢铵水溶液，B相为甲醇，体积比A/B:5/95-40/60；

e.A相为磷酸氢二钾水溶液，B相为乙腈，体积比A/B:5/95-40/60；

f.A相为磷酸氢二钾水溶液，B相为甲醇，体积比A/B:5/95-40/60。

其中碳酸氢铵水溶液，浓度5-200mM，pH 7.9；

磷酸氢二钾水溶液，浓度5-200mM，pH 7。

8.按照权利要求4或5所述方法，其特征在于：

洗脱糖肽的洗脱溶剂组成如下任一之一所示：

a.A相为水，B相为乙腈，体积比A/B:50/50-99/1；

b.A相为水，B相为甲醇，体积比A/B:50/50-99/1；

c.A相为甲酸水溶液，B相为乙腈，体积比A/B:50/50-99/1；

d.A相为甲酸水溶液，B相为甲醇，体积比A/B:50/50-99/1；

e.A相为乙酸水溶液，B相为乙腈，体积比A/B:50/50-99/1；

f.A相为水溶液，B相为甲醇，体积比A/B:50/50-99/1；

其中甲酸水溶液，体积含量0.1-10%，pH 1-4；

其中乙酸水溶液，体积含量0.1-10%，pH 1-4。

9.按照权利要求1、4或5所述方法，其特征在于：

肽样品的样品浓度为0.1ng/mL-1mg/mL；富集温度为15-60℃。

10.按照权利要求1、4或5所述方法，其特征在于：

所述肽样品为蛋白酶解液；

所述蛋白为组织、细胞、血清或尿液等生物样品中的蛋白或者是糖蛋白标准品（转铁蛋白、胎球蛋白、辣根过氧化酶、核糖核酸酶B等）中的一种或二种以上混合；

所述酶为胰蛋白酶、内肽酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶中的一种或二种以上混合。