[发明专利]一种剑水蚤类浮游动物体表附着细菌的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一种剑水蚤类浮游动物体表附着细菌的检测方法。

背景技术

近年来，我国不断出现剑水蚤类浮游动物穿透饮用水处理工艺系统进入管网的事件，使饮用水安全受到威胁与挑战。水厂的实践证明，水处理工艺不能彻底去除水中剑水蚤，剑水蚤成体肉眼可见，其在水处理工艺系统中的出现带来用户的感官性状问题；同时剑水蚤可作为细菌的载体或其他致病性原生动物的中间宿主，并对其提供庇护，引起水质生物安全问题。有研究表明，部分水中细菌可以在剑水蚤的体表上稳定附着（普通的水流冲洗或漂洗难以有效实现二者的完全分离），并随剑水蚤在水中迁移；剑水蚤的体表可为其携带的细菌提供庇护，附着在剑水蚤类浮游动物体表上的细菌的氯消毒抵抗能力增加了30～120倍，未被灭活的体表附着细菌对饮用水安全产生潜在的威胁。

文献表明，目前国内外对于水中无脊椎类浮游动物体表附着细菌的检测主要是采用Wolmarans.E提出的方法。该方法以蒸馏水或者生理盐水浸泡浮游动物，通过浮游动物体表附着细菌向水中的自然释放来获得体表附着细菌的样品，有时为了增加释放效率也会采用手摇或摇床振荡等辅助手段。尽管如此，此类方法的浮游动物体表附着细菌的脱附效率仍然不高。采用此类方法脱附剑水蚤类浮游动物体表附着细菌后，进行培养基培养检测，存在剑水蚤类浮游动物体表附着细菌的检测值偏低且波动性较大等弊端。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种剑水蚤类浮游动物体表附着细菌的检测方法，该法操作步骤简单，检测周期短，对于剑水蚤类浮游动物体表附着细菌的检测效果显著。

一种剑水蚤类浮游动物体表附着细菌的检测方法，包括以下步骤：

步骤1，取水样中的剑水蚤，将其洗涤至无细菌检出；

步骤2，将步骤1所得剑水蚤放入离心管中，加入解吸剂；

步骤3，将步骤2中离心管放入离心机离心处理；

步骤4，取离心后的上清液，用生活饮用水标准检验法中细菌总数的测定方法进行细菌培养，培养后的菌落进行计数；

所述解吸剂的各成分质量浓度分别为：氯化钠0.7～1.2%，吐温800.08～0.12%，磷酸氢二钠0.2～0.3%，磷酸二氢钾0.1～0.3%，其余为无菌超纯水。

上述剑水蚤类浮游动物体表附着细菌的检测方法，步骤2中加入解吸剂的用量为1～2mL/14mL无菌水。

步骤1洗涤水样中的剑水蚤是为了避免取样过程中水样中的自由细菌对剑水蚤体表附着细菌检测的影响，可以采用无菌水冲洗或者浸洗等方式去除水样中的自由细菌。

但是为了使自由细菌清洗彻底，缩短清洗时间，同时又避免在清洗过程中体表细菌过多损失，上述的洗涤方法最好是这样操作：取水样中的剑水蚤置于无菌滤网上，用无菌超纯水冲洗无菌滤网上的剑水蚤，至滤网流出的冲洗水中不得检出细菌。

上述剑水蚤类浮游动物体表附着细菌的检测方法，步骤1和步骤4中细菌检测是根据GB/T5750.12-2006中细菌总数的测定方法进行的。

本发明与现有技术相比其显著优点为：第一，体表附着细菌脱附效率高、速度快，采用解吸剂进行体表附着细菌的脱附，较现有技术常用的蒸馏水或生理盐水中自然释放更加彻底、效率高，配合离心法脱附，使得脱附时间大大降低，提高了附着细菌的脱附速度；第二，准确度高、检测结果稳定可靠。

具体实施方式

实施例1

试验用的剑水蚤类浮游动物取自太湖原水，蚤属为中华窄腹剑水蚤（Limnoithona sinensis），剑水蚤与原水一起采样后带回实验室备用。

步骤1，用3mL巴氏吸管逐个吸取水样中的成体剑水蚤，置于30μm无菌滤网上；吸取15只成体剑水蚤为一组。

步骤2，在无菌条件下，用无菌超纯水冲洗无菌滤网上的剑水蚤，每次冲洗的无菌水量为25mL，以最后2次冲洗完成后，滤网流出的冲洗水中不得检出细菌（生活饮用水标准检验法（微生物指标）（GB/T5750.12-2006）中细菌总数的测定方法）为结束冲洗的依据。

经实验证明，用无菌水冲洗无菌滤网上的剑水蚤7次可以达到要求。检测结果如表1所示。

表1每次洗涤水中的细菌数量