[发明专利]一种高从侧柏叶中提取扁柏双黄酮的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种从侧柏叶中提取扁柏双黄酮的方法。

背景技术

扁柏双黄酮为黄酮类物质，CAS编号19202-36-9，熔点 353-355°，分子量为C30H18O10，分子量为538.47。分子结构式：

现代研究发现扁柏双黄酮具有抗炎、抗菌及抗肿瘤等作用。

通过文献检索，扁柏双黄酮制备方法多采用色谱法，如专利“一种扁柏双黄酮的制备方法”，该专利公开的方法是采用聚酰胺色谱柱分离。此类方法试剂用量大，纯化过程复杂，很难实现工业化生产。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种操作简便的从卷柏中提取扁柏双黄酮的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种从侧柏叶中提取扁柏双黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）取侧柏叶粉碎加入5-10倍量饱和石灰水浸泡提取2-3次，提取液加入超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，得浓缩液；

2) 浓缩液调节ph至3-5后加入大孔树脂柱中吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩调节ph3-5结晶，

3）滤出结晶用50%-80%甲醇溶液溶解，浓缩至醇浓度至10%-30%，加入大孔树脂吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩结晶，结晶物再用70%乙醇溶液重结晶，干燥即得。

所述步骤1）中的超滤膜为截留分子量3000-10000的中空纤维素膜，纳滤膜为截留分子量100-500的中空纤维素膜。

所述步骤2）和3）的大孔树脂中的为D101、AB-8、HPD100和HZ816中的一种。

所述步骤2）和3）的乙醇梯度洗脱为：先取5-10倍柱体积20%-40%乙醇溶液洗脱杂质，再用5-10倍柱体积50%-80%乙醇洗脱有效成分。

采用上述技术方案生产扁柏双黄酮，工艺简单易操作，而且能耗低，易于实现工业化生产。

具体实施方式

   下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：

取20kg侧柏叶粉碎加入10倍量饱和石灰水浸泡提取2次，提取液滤过加入截留分子量3000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量500的中空纤维素膜浓缩，浓缩液调节ph至5后加入D101大孔树脂柱中吸附，先取5倍柱体积20%乙醇溶液洗脱杂质，再用10倍柱体积50%乙醇洗脱有效成分，洗脱液浓缩调节ph3结晶。滤出结晶用80%甲醇回流溶解，浓缩至醇浓度至10%，加入D101大孔树脂柱中吸附，先取5倍柱体积30%乙醇溶液洗脱杂质，再用7倍柱体积60%乙醇洗脱有效成分，洗脱液浓缩结晶，结晶物再用70%乙醇溶液重结晶，干燥，得扁柏双黄酮28g，经HPLC检测，含量98.5%。

 实施例2：

取20kg侧柏叶粉碎加入5倍量饱和石灰水浸泡提取3次，提取液滤过加入截留分子量6000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量400的中空纤维素膜浓缩，浓缩液调节ph至5后加入AB-8大孔树脂柱中吸附，先取6倍柱体积30%乙醇溶液洗脱杂质，再用7倍柱体积60%乙醇洗脱有效成分，洗脱液浓缩调节ph4结晶。滤出结晶用50%甲醇回流溶解，浓缩至醇浓度至20%，加入AB-8大孔树脂柱中吸附，先取10倍柱体积20%乙醇溶液洗脱杂质，再用7倍柱体积65%乙醇洗脱有效成分，洗脱液浓缩结晶，结晶物再用70%乙醇溶液重结晶，干燥，得扁柏双黄酮32g，经HPLC检测，含量98.8%。

实施例3：

取20kg侧柏叶粉碎加入5倍量饱和石灰水浸泡提取3次，提取液滤过加入截留分子量6000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量400的中空纤维素膜浓缩，浓缩液调节ph至5后加入HZ816大孔树脂柱中吸附，先取6倍柱体积30%乙醇溶液洗脱杂质，再用7倍柱体积60%乙醇洗脱有效成分，洗脱液浓缩调节ph4结晶。滤出结晶用50%甲醇回流溶解，浓缩至醇浓度至10%，加入HZ816大孔树脂柱中吸附，先取6倍柱体积20%乙醇溶液洗脱杂质，再用7倍柱体积60%乙醇洗脱有效成分，洗脱液浓缩结晶，结晶物再用70%乙醇溶液重结晶，干燥，得扁柏双黄酮29g，经HPLC检测，含量98.1%。

 实施例4：

取20kg侧柏叶粉碎加入5倍量饱和石灰水浸泡提取3次，提取液滤过加入截留分子量3000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量300的中空纤维素膜浓缩，浓缩液调节ph至5后加入HPD100大孔树脂柱中吸附，先取6倍柱体积30%乙醇溶液洗脱杂质，再用7倍柱体积60%乙醇洗脱有效成分，洗脱液浓缩调节ph4结晶。滤出结晶用50%甲醇回流溶解，浓缩至醇浓度至20%，加入HPD100大孔树脂柱中吸附，先取5倍柱体积20%乙醇溶液洗脱杂质，再用7倍柱体积60%乙醇洗脱有效成分，洗脱液浓缩结晶，结晶物再用70%乙醇溶液重结晶，干燥，得扁柏双黄酮28g，经HPLC检测，含量98.5%。