[发明专利]一种用于诱导系统性硬化症模型的装置

说明书

技术领域

本发明属医学研究用生物器材领域，涉及微渗透压泵装置。具体涉及一种用于诱导系统性硬化症模型的微渗透压泵装置。

背景技术：

硬皮病(scleroderma)是一种以皮肤及各系统组织纤维化为特征的结缔组织疾病。一旦内脏受累又称为系统性硬化症(systemic sclerosis，SSc)，此类患者病情趋于恶化，5年生存率为34～80％。

系统性硬化症发病机制错综复杂，目前研究结果认为，在遗传易感性基础上，由于环境因素刺激而激活机体的炎症反应和自身免疫应答，进而血管内皮细胞受损，成纤维细胞活化、增殖，大量合成细胞外基质，造成组织纤维化，随着病情发展，炎症消退，纤维化反应仍不可逆转，最终导致多系统血管病变、组织纤维化和内脏功能衰竭，病情难以逆转，且至今尚无有效治疗手段，因此，对系统性硬化症的发病机制和治疗靶点深入探讨已引起本领域研究人员的关注。

研究实践显示，建立稳定的体内、外研究模型，对于阐明发病机制和遴选治疗药物具有非常重要的意义。实践显示，目前已知的模型均存在一定的局限性：1999年Yamamoto等人采用博来霉素皮下注射制备了皮肤硬化动物模型，此模型以局限性皮肤纤维化为主，内脏受累发生率低，且需要每日注射，工作量大，还易导致小鼠皮肤的局限性溃烂；紧皮鼠(Tskl^/+小鼠)是原纤维蛋白1(fibrill in1，FBN1)基因编码变异所致，可自发产生硬皮病样改变，以弥漫性皮肤肥厚为特征，与人类硬皮病不同，紧皮鼠皮下组织异常增生，而真皮层未受明显影响，易发展成肺气肿样改变而非纤维化反应，基本不出现血管病变，炎症改变亦不明显；移植物抗宿主反应模型亦可表现为皮肤纤维化，皮肤脂肪层消失以及单核细胞浸润，但相关品系小鼠获得成本高，培养环境要求较严格，不宜推广。目前已知，Alzet Osmotic Pumps是体积只有胶囊大小的渗透压泵，适合植入实验动物体内，针对特定部位给药，或将药剂用导管导入作用部位，在生命科学实验研究中，Alzet pumps已成功的运送上百种药剂，包括蛋白质，多肽，生长因子，基因研究及治疗中的Antisense和最新的干扰RNA(RNAi)，抗生素，化疗药，激素，类固醇及其它短效期的化合物。通过ALZET Osmotic pumps持续给药可以建立多种疾病的动物模型，如高血压及Parkinson帕金森病的动物模型，其在动物细胞给药、动物模型建构、药物及分子筛选、药理药代药效等众多领域发挥了不可替代的作用。Alzet微渗透压泵作为一种利用微渗透压原理制备的组织相容性的药物缓释系统，1987年Harrison JH等人采用微渗透压泵装载博来霉素(100mg/kg)皮下植入C57BL/6小鼠4～8周诱导肺纤维化的动物模型。但目前尚无采用Alzet微渗透压泵制备硬皮病研究模型的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于诱导系统性硬化症模型的装置，尤其涉及一种用于诱导出稳定的系统性硬皮病模型的微渗透压泵装置。本发明所述的微渗透压泵装置具有稳定性、重复性、可操作性和标准化的特点。

本发明经过反复实验，摸索相关实验条件，采用Alzet微渗透压泵(可市购)局部予以脂多糖急性刺激，辅以博来霉素缓释，能模拟系统性硬化症的发生，尤其适用于系统性硬皮病发病机制和治疗靶点的研究及深入探讨。

具体的，本发明的一种用于诱导系统性硬化症模型的装置，其包括Alzet微渗透压泵(可市购)，脂多糖和博来霉素，所述的博来霉素(Sigma)溶液装载于Alzet(Model2004)微渗透压泵中，所述的脂多糖(LPS)溶液包被于所述的泵表面。

本发明中，Alzet微渗透压泵(可市购)为Alzet(Model2004)；

本发明中，博来霉素(Bleomycin，BLM，Sigma)工作液浓度为12mg/ml，博来霉素以0.25ul/h的速度持续释放于外界环境；

本发明中，脂多糖(LPS)生理盐水溶液浓度为100ng/ml；

本发明的用于诱导系统性硬化症模型的装置，其特征在于，通过下述方法制得：

在无菌超净台中将博来霉素(Sigma)溶液装载于Alzet(Model2004)微渗透压泵中，盖紧旋帽后浸于脂多糖(LPS)溶液，在37℃温箱中放置40小时备用；

其中，博来霉素(Bleomycin，BLM，Sigma)工作液浓度为12mg/ml，博来霉素以0.25ul/h的速度持续释放于外界环境；

脂多糖(LPS)生理盐水溶液浓度为100ng/ml。