[发明专利]一种桉叶黄酮类化合物的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及黄酮类物质的提取方法，具体涉及桉叶黄酮的提取方法。

背景技术

黄酮类化合物无毒，广泛存在与植物界中，人体不能合成，而且在人体内代谢很快。近年来黄酮类化合物的提取成为热点，寻找高效，迅速且简单的提取方法获得最佳结果已成为研究者探讨的热点。溶剂提取法是目前对于黄酮等天然化合物的主要提取方法，但是该方法存在大量有机溶剂残留、污染环境、提取物质杂质含量大等缺陷。而且植物中的活性成分存在于细胞中，其外壁是由木质素、纤维素、半纤维素、果胶质等物质构成，细胞内同时存在着蛋白质、脂质化合物、糖类等多种物质，形成黄酮等天然化合物提取纯化的障碍，因此，黄酮类化合物的提取会受到阻碍，收率较低。

近年来陆续有研究者采取液相酶中的水相酶酶解法降解细胞壁、胞间连接物和一些干扰提取的成分，不仅可以缩短提取时间，而且可以提高有效成分的收率。但是液相酶应用也存在一些不足，液相酶应用后需进行灭活处理，昂贵的酶仅能利用一次，致使生产成本提高，而且它们会残留在提取物中，成为新的杂质，而采用固定化酶可以避免此类问题。目前常用的固定化酶载体是不溶于水的材料，如壳聚糖微球、聚四氟乙烯膜、海藻酸钙等，酶被固定化于这些固体材料表面或者内部，使用完成后容易从体系中分离且不对产物造成污染，能够实现对酶的重复利用。

超临界流体具有许多独特的性，由于质超临界流体液体与气体分界消失，是即使提高压力也不液化的非凝聚性气体。超临界流体的物性兼具液体性质与气体性质。它基本上仍是一种气态，但又不同于一般气体，是一种稠密的气态。其密度比一般气体要大两个数量级，与液体相近。它的粘度比液体小，但扩散速度比液体快(约两个数量级)，所以有较好的流动性和传递性能。很多物质都有超临界流体区，但由于CO₂的临界温度比较低(304.1K)，临界压力也不高(7.38MPa)，且无毒，无臭，无公害，所以在实际操作中常使用CO₂超临界流体。近年来，利用超临界二氧化碳萃取技术提取具有生理活性的天然产物越来越受到人们的关注。超临界二氧化碳流体无毒、廉价、化学性质惰性、无溶剂残留、无污染、能保持天然成分活性，是优良的环保型溶剂，由于超临界二氧化碳萃取技术绿色环保的特点，因此具有非常广阔的应用前景。

桉树是世界上最广泛引种的速生树种之一，很久以来，人们就用桉树叶提制桉叶油，供作香料、医药等工业原料。近年来，有关桉树叶中黄酮类的研究已有陆续报道，黄酮类是具有多功能生理活性的一类化合物，至少具有35种不同的生理活性。据国内外有关文献桉叶黄酮类化合物有抗微生物活性；它在医药上可做治疗心血管疾病的辅助药，对急性肾盂肾炎、腹泻、烧伤等病有较好疗效，此外其有效成份还能促进作物生长和发育；澳大利亚和美国曾报导筛选出8种含黄酮甙很高的树种，目前已用长咀桉和尤曼桉的树叶每年离析出十吨左右的芸香甙供医药应用。我国南方生长大量人工桉树林，以雷州林业局年产10万立方米桉材计，对桉树叶黄酮类化合物的研究具有一定的经济价值。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种桉叶黄酮的提取方法，提取方法有机溶剂残留低、无环境污染，收率高，得到的桉叶黄酮杂质含量低，将桉叶充分利用，提高了桉叶的附加值。

本发明的桉叶黄酮的提取方法是通过以下步骤实现的：

一、采摘无病害的桉属植物的叶子，用水清冲洗干净，然后在60～100℃条件下干燥至叶子中水分的质量百分含量低于3％，再将干燥后的叶子粉碎至粒径为60～100目，得桉树叶子粉体；

二、将步骤一得到的桉属植物叶子粉体和固定化酶混合得萃取料，其中桉属植物叶子粉体和固定化酶的质量比为20～100∶1，固定化酶中采用的酶为纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、半纤维素酶和蜗牛酶中的一种或其中的几种；

三、将步骤二的萃取料装入萃取釜，进行超临界二氧化碳萃取得萃取混合物，其中萃取条件如下：萃取压力为25MPa～45MPa，萃取温度50～75℃，超临界二氧化碳流量为25～50kg/h，萃取时间为2h～3h；

四、将步骤三得到的萃取混合物通过减压分离釜，进行二级分离，其中一级减压分离压力为5～10MPa，温度为40～50℃，二级减压分离压力为4～5MPa，温度为30～40℃，获得桉叶黄酮提取物，即完成桉叶黄酮的提取方法。