[发明专利]一类吲哚里西啶生物碱及其制备方法和应用

说明书

一技术领域

本发明属于微生物工程技术领域，具体涉及从白姑鱼肠道真菌IFB-Z10（Curvularia sp.）的液体发酵物中提取的一类吲哚里西啶生物碱及其制备方法和应用。

二背景技术

随着环境微生物的不断发现，从其次生代谢产物中发现骨架新颖或生物活性显著的抗生素越来越困难。近年来，研究人员将目光更多地投向了具有巨大潜力的海洋资源，并且已经从中发现了很多骨架新颖或是具有显著生物活性的药源分子，为进一步研究新型抗生素分子奠定了基础。目前，临床上滥用抗生素的现象愈演愈烈，已经造成了很多耐药病原菌的产生，尤其是耐药细菌，甚至还出现了所谓的超级细菌。因此传统的抗生素已经显得无能为力，科学家迫切希望能够找到一种新型的抗生素分子，对付这些临床耐药菌株，从而从根本上解除患者的痛苦。

三发明内容

本发明从海洋鱼类白姑鱼（Argyrosomus argentatus）的肠道共生菌弯孢霉属真菌IFB-Z10（Curvularia sp.）的液体发酵物中提取到一类具有显著抑制临床厌氧菌活性的吲哚里西啶生物碱。

本发明需要解决的问题是：

1.提供一类具有临床厌氧病原菌抑制活性的吲哚里西啶类生物碱。

2.提供一种制备吲哚里西啶类生物碱的方法。

3.弯孢菌吲哚里西啶类生物碱在抑制临床厌氧菌药物中的应用。

本发明的技术方案：

本发明所述弯孢菌引自发明专利“一种弯孢霉菌及吲哚里西啶生物碱的制备方法和应用，专利号ZL201110105504.6”，本发明所述弯孢菌吲哚里西啶生物碱，具有下述结构式：

弯孢菌吲哚里西啶生物碱Curvulamines A-C(1-3)的单晶结构图见说明书附图1-3。

弯孢菌吲哚里西啶生物碱制备方法，包括下述步骤：

1.将从新鲜的白姑鱼中分离、纯化得到的弯孢霉IFB-Z10的菌体块接种到改良查氏培养基中，于摇床上，在150rpm、28℃条件下发酵12天；

2.将步骤1所得发酵液经纱布过滤，滤液用乙酸乙酯萃取，真空浓缩干燥得黑色粗浸膏F；

3.对步骤2所得浸膏F进行硅胶柱层析分段，采用氯仿/甲醇梯度洗脱：100:0,100:1，100:2，100:4，100:8，100:16，得到6个洗脱部分F1-F6；

4.对浸膏F1,F2和F4反复采用硅胶柱层析、反相C-18柱层析以及Sephadex LH-20层析分离纯化得到含有三个新化合物的部位F1-1，F2-2和F4-2；

5.F1-1，F2-2和F4-2经高压液相色谱法[色谱柱：ODS-2Hypersil columns(5μ,250×10mm)]制备得到化合物1-3。

本发明所述吲哚里西啶生物碱具有显著抑制临床厌氧菌的作用，且不具有细胞毒性，因此可作为一种新颖的抗生素，并在制备抗生素药物中得到应用。

与现有技术相比，本发明具有下述突出优点：

1.本发明所述吲哚里西啶生物碱是骨架新颖的化合物，可制备成新型抗生素或先导化合物，克服现有抗生素耐药性的缺点。

2.本发明所述吲哚里西啶生物碱可以利用微生物进行液体发酵生产，工艺简便，周期短，成本低，来源有保证。

附图说明

图1为化合物1的单晶结构图（包含一个甲醇分子）。

图2为化合物2的单晶结构图。

图3为化合物3的单晶结构图。

具体实施方式

通过下面给出的具体实施例可以进一步了解本发明。但它们不是对本发明的限定。

实施例1：海洋来源的弯孢霉IFB-Z10（Curvularia sp.）的液体发酵

活化海洋来源的弯孢霉IFB-Z10，将新鲜的菌体块接种到1000ml锥形瓶中，每瓶含有400ml的改良查氏培养基，接种5－6瓶于摇床上，在150rpm、28-30℃条件下培养3天作为种子液，然后以20ml的接种量将种子液接种于含有400ml的改良查氏培养基的1000ml锥形瓶中，在150rpm、28-30℃条件下发酵12天。

实施例2：吲哚里西啶生物碱的提取与分离