[发明专利]一种适用于多种生物的检测PCR反应假阴性的引物

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体地说，涉及一种适用于多种生物的检测PCR反应假阴性的引物。

背景技术

PCR技术即聚合酶链式反应，用于放大特定的DNA片段，是现代分子生物研究的基础技术之一，已广泛应用于感染性疾病、肿瘤、遗传病、寄生虫病、法医学、动植物和考古等的诊断和研究中。PCR技术有着灵敏度高、特异性强、快速简便的优点，但是也有其局限性，导致结果不是非常可靠性，其中常见的是假阳性和假阴性的问题。

假阳性是指不含目的片段的模板经过PCR，扩增出了与目的模板大小差不多的片段，给人一种含有目的片段的假象。假阴性是指模板中含有目的片段，但由于实验各方面的原因，没有扩增出目的条带，让人误以为是阴性，所以叫假阴性，说明PCR反应体系中存在抑制物。

PCR的假阳性问题深受重视，假阴性则相对重视不够，但PCR假阴性问题相对于某些方面更为严重，比如临床检测中大三阳检出率低，假阴性就是“罪魁祸首”，可见假阴性问题的严重性。实际上PCR假阳性的问题是比较单纯的，一般仅涉及反应体系污染和引物的特异性问题，都可以很好地解决。而PCR的假阴性问题却不同，它涉及了参与PCR实验的几乎所有人员和技术环节，十分复杂，包括仪器因素、试剂因素、模板因素、操作人员素质及其他因素，很难找到具体原因，较难排查。

因而若能够有一条大小合适的DNA片段作为指示条带，针对该指示条带设计一对特异性强、灵敏度高的引物，直接检测PCR反应是否受抑制即是否存在假阴性问题，使结果真实可靠，显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种引物。

本发明的再一的目的是，提供上述引物的用途。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种引物，所述的引物包含序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

如上所述的引物在检测PCR反应是否为假阴性反应中的用途，所述的PCR反应其DNA模板包含SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，例如DNA模板是人、大鼠、小鼠、兔、牛、猪、狗、猴或鸡全基因组DNA。

本发明优点在于：

本发明提供了一对可以特异性扩增人、大鼠、小鼠、兔、牛、猪、狗、猴、鸡等多种生物全基因组DNA中152bp DNA片段的引物，该引物特异性强、灵敏性高、实验重复性好。以该引物为对照，可以检测以人、大鼠、小鼠、兔、牛、猪、狗、猴、鸡全基因组DNA为模板的PCR反应是否为假阴性，使PCR结果更有说服力，尤其针对目前临床上易于出现假阴性的疾病诊断，本发明更是为疾病的确诊提供了保障。该引物可用于制备成试剂盒，为科学研究和临床诊断排除PCR假阴性提供便利。

附图说明

附图1是使用本发明的引物，分别以人、大鼠全基因组DNA为模板扩增152bp DNA目的指示条带的电泳图谱。M泳道是NEB的100bp DNA Ladder，从下到上分别是100bp、200bp、300bp、400bp、500bp（加亮）、600bp、700bp、800bp、900bp、1000bp（加亮）、1200bp、1517bp；泳道1、2分别是以人、大鼠全基因组DNA为模板的152bp DNA目的指示条带扩增产物。

附图2是使用本发明的引物，分别以人、大鼠、小鼠、兔、牛、猪、狗、猴、鸡9种生物全基因组DNA为模板扩增152bp DNA目的指示条带的电泳图谱。M泳道是NEB的100bp DNA Ladder，从下到上分别是100bp、200bp、300bp、400bp、500bp（加亮）、600bp、700bp、800bp、900bp、1000bp（加亮）、1200bp、1517bp；泳道1-9分别是以人、大鼠、小鼠、兔、牛、猪、狗、猴、鸡全基因组DNA为模板的152bp DNA目的指示条带扩增产物。

具体实施方式

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1

1、引物设计

选择多种生物保守序列中的一段152bp DNA序列（SEQ ID NO.1），针对该序列设计一对PCR扩增引物，命名为ECP-F和ECP-R。其具体序列为：

ECP-F（SEQ ID NO.2）：5’- TTCTTGATCGGGTTTGGGGG -3’；

ECP-R（SEQ ID NO.3）：5’- CAGCTGCCTCTTTCAATGCC -3’。