[发明专利]一种分子伴侣TSPcpn47和编码此分子伴侣的多核苷酸

说明书

技术领域

    本发明涉及一种分子伴侣TSPcpn47和编码此分子伴侣的多核苷酸，分子伴侣在生物体内起着稳定新生蛋白、辅助其他蛋白质正确折叠，提高蛋白质的稳定性，属于生物技术领域。 

背景技术

    分子伴侣是一类在进化上非常保守的蛋白质家族，它能非特异性结合不同结构、大小和功能的蛋白质并催化介导这些蛋白质形成特定的构象，在生物体内起着稳定新生蛋白、辅助其他蛋白质正确折叠、组装、转运甚至降解的作用，在胁迫条件下，分子伴侣起到稳定蛋白质结构的作用并防止蛋白质凝聚、变性，还具有修复变性蛋白的功能，对蛋白质功能的发挥具有重要意义。 

 第一个分子伴侣----核质蛋白(nucleoplasmin)是Laskey等人于1978年在非洲爪蟾卵的浸出液中发现的，他们通过研究组蛋白与DNA结合形成核小体的过程中，必须依靠一种酸性核蛋白(nucleoplasmin) 的参与才能完成它们的装配。体外试验也表明，只有将组蛋白与过量的酸性核蛋白混合，才能令其与后加入的DNA组装最终形成核小体结构，但形成的核小体中并没有酸性核蛋白。当仅有DNA与组蛋白存在时，并不能自我组装成核小体结构，而是形成沉淀。 

迄 今 为 止 发 现 的 大 多 数 的 分 子 伴 侣 都 属 于 热 休 克 蛋 白 (heat shock protein，HSP)的范畴，大 致 可 主 要 分 为 伴 侣 素 家 族 (chaperonin,Cpn )、热 休 克 蛋 白 7 0 家 族 (HSP 70 family)、热 休 克 蛋 白 9 0 家 族 (HSP 90 family)以及热休克蛋白100家族等保守的蛋白家族，目前还没有来源于栖热菌噬菌体的分子伴侣的报道，分子伴侣因其可以提高蛋白质（酶）的稳定性而使其在工业上具有应用价值。 

发明内容

本发明旨在提供一种分子伴侣TSPcpn47，该分子伴侣TSPcpn47来源于高温栖热菌的噬菌体TSP4，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。 

本发明的另一个目的是提供一种编码分子伴侣TSPcpn47的多核苷酸，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。 

本发明的有益效果： 

本发明获得的栖热菌噬菌体TSP4的分子伴侣TSPcpn47，能够单独的行使分子伴侣功能，即帮助变性的蛋白复性，并且防止其它蛋白在高温、酸性等条件下变性，可利用于在高温等环境下协助功能蛋白保持其活性，减少蛋白变性，对保护功能蛋白的生理活性具有重要作用，其核苷酸序列可以用于构建能催化形成以上产物的基因工程菌株。

附图说明

图1是本发明分子伴侣TSPcpn47基因的克隆片段电泳示意图； 

图2是本发明分子伴侣TSPcpn47基因保守结构域分析示意图；

图3是本发明分子伴侣TSPcpn47基因、pET-28a(+)的酶切示意图，其中泳道1为分子伴侣TSPcpn47基因的酶切胶回收产物，泳道2为pET-28a(+)，泳道3为Marker；

图4是本发明分子伴侣TSPcpn47基因表达蛋白的SDS-PAGE分析检测电泳图，其大小为为29000道尔顿，其中泳道1为Protein Marker；泳道2为Ro-pET28a破碎后的上清；泳道3Ro-pET28a-TSPcpn47破碎后的上清；泳道4为Ro-pET28a破碎后的沉淀；泳道5为Ro-pET28a-TSPcpn47破碎后的沉淀。

图5是本发明分子伴侣TSPcpn47纯化SDS-PAGE分析检测电泳图，其中泳道1为Protein Marker；泳道2为pET28a-TSPcpn47/ Rosetta破碎后的上清；泳道3为pET28a-TSPcpn47/ Rosetta破碎后的上清过His-trap柱；泳道4为10mM咪唑洗脱液；泳道5为150mM咪唑洗脱液；泳道6为500mM咪唑洗脱液；泳道7为500mM咪唑洗脱液； 

图6是本发明蛋白含量标准曲线示意图；

图7是本发明磷酸盐浓度标准曲线示意图；

图8是本发明温度对分子伴侣TSPcpn47活性的影响；

图9是本发明分子伴侣TSPcpn47对GFP荧光强度恢复的帮组作用；

图10是本发明分子伴侣TSPcpn47对 GFP热稳定性的影响。

具体实施方式