[发明专利]酶联免疫斑点计生四项联合试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及一种酶联免疫斑点技术一次性检测计生四种病毒（种）的试剂盒，属于医疗诊断计生四项联合试剂盒检测技术领域。 

背景技术：

四项计生检测是针对育龄妇女在怀孕早期开展的旨在预防新生儿出生缺陷的一项重要的检测措施，它对于提高出生人口素质，减少新生儿出生风险具有重要的意义，已被医疗机构和孕产妇广泛接受和应用。四项计生检测包括风疹病毒，巨细胞病毒、弓形体和单纯疱疹病毒。通过四项计生检测可检测出孕妇和胎儿是否存在感染的情况，并有针对性地治疗或终止妊娠。 

目前应用免疫斑点法来检测诊断这四项疾病时，每项疾病的检测单独操作完成，各种试剂均为分散放置，没有特制的斑点反应板，所以检测过程复杂、时间长、携带及操作不方便。如：化学反应法及Elisa法均一次一种地操作及分别使用各自的试剂盒。 

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术的缺点，把计生四项即四种不同的病种放到一个反应板上，一次性操作即可得出四种疾病的诊断结果，减少了频繁的操作程序，节约人力、物力、节省时间，易于观察并做出诊断。 

为了实现上述发明目的，本发明设有载体板、巨细胞病毒（CMV）抗体（抗原）检测线（点）、弓形虫（TO）抗体（抗原）检测线（点）、风疹病毒（RV）抗体（抗原）检测线（点）、单纯疱疹病毒（HSV-1）抗体（抗原）检测线（点）、对照线（点）、硝酸纤维素膜（NC膜）、温育槽；硝酸纤维素膜粘贴在载体板的表面，巨细胞病毒抗体（抗原）检测线（点）、弓形虫抗体（抗原）检测线（点）、风疹病毒抗体（抗原）检测线（点）、单纯疱疹病毒抗体（抗原）检测线（点）、对照线（点）自上而下依次设在硝酸纤维素膜上，并在各检测线（点）和对照线（点）四周制有温育槽；在巨细胞病毒抗体（抗原）检测线（点）、弓形虫抗体（抗原）检测线（点）、风疹病毒抗体（抗原）检测线（点）、单纯疱疹病毒抗体（抗原）检测线（点）处分别包被对应的抗原（抗体）；在对照线或对照点处自左至右分别包被巨细胞病毒抗原、弓形虫抗原、风疹病毒抗原、单纯疱疹病毒抗原或分别包被含巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体的病人阳性血清。 

本发明的制备方法如下： 

1、抗巨细胞病毒抗体、抗弓形虫抗体、抗风疹病毒抗体、抗单纯疱疹病毒抗体或巨细胞病毒抗体（抗原）、弓形虫抗体（抗原）、风疹病毒抗体（抗原）、单纯疱疹病毒抗体（抗原） 市售购买； 

2、标准阳性血清的获得： 

收集风疹病毒、巨细胞病毒、弓形体和单纯疱疹病毒病人的阳性血清，得到阳性参照血清，定为标准阳性血清，-30℃冻存； 

阳性病人的血清必须经过Elisa实验，结果为阳性(显色明显，阳性OD值/阴性OD值≥2.1)；经过荧光免疫实验（IFA），结果为阳性结果。 

3、硝酸纤维素膜的点样：巨细胞病毒抗体（抗原）检测线（点）、弓形虫抗体（抗原）检测线（点）、风疹病毒抗体（抗原）检测线（点）、单纯疱疹病毒抗体（抗原）检测线（点）和对照线（点）自上而下依次设在硝酸纤维素膜上，并在各检测线（点）和对照线（点）四周制有温育槽；在硝酸纤维素膜的各病毒（种）检测线(点)上分别包被巨细胞病毒抗原（抗体）、弓形虫抗原（抗体）、风疹病毒抗原（抗体）、单纯疱疹病毒抗原（抗体）；在各对照线（点）上自左至右分别包被巨细胞病毒抗原、弓形虫抗原、风疹病毒抗原、单纯疱疹病毒抗原或自左至右分别包被含巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体的病人阳性血清；晾干； 

4、抗巨细胞病毒抗体、抗弓形虫抗体、抗风疹病毒抗体、抗单纯疱疹病毒抗体或巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体的碱性磷酸酶标记或辣根过氧化物酶标记； 

5、制备免疫斑点试剂盒 

用切条机将载体板切成条状，将硝酸纤维素膜粘贴在载体板表面；和用酶标记的抗巨细胞病毒抗体、抗弓形虫抗体、抗风疹病毒抗体、抗单纯疱疹病毒抗体或巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体及碱性磷酸酶底物或辣根过氧化物酶底物四甲基联苯胺TMB共同组成计生四项免疫斑点试剂盒；所述碱性磷酸酶底物是硝基蓝四唑和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐BCIP比例为1：49的混合物。 

本发明一次性快速检测计生四项、操作简单，成本低、设计新颖，易被使用者喜爱，更便于普及使用。 

附图说明：

1、图1为点状酶联免疫斑点计生四项联合试剂盒结构示意图； 

2、图2为线状酶联免疫斑点计生四项联合试剂盒结构示意图。