[发明专利]毕赤酵母菌优化的虹鳟鱼抗菌肽、含有其的表达载体、菌株及应用在审
| 申请号： | 201310370580.9 | 申请日： | 2013-08-22 |
| 公开（公告）号： | CN103667300A | 公开（公告）日： | 2014-03-26 |
| 发明（设计）人： | 罗琳;姜娜;马志宏;李铁梁;邢薇 | 申请（专利权）人： | 北京市水产科学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/81;C12N1/19;A61K48/00;A61K38/17;A61P31/04;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京律诚同业知识产权代理有限公司 11006 | 代理人： | 梁挥 |
| 地址： | 100068*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酵母菌 优化 虹鳟鱼 抗菌 含有 表达 载体 菌株 应用 | ||
1.一种毕赤酵母菌优化的虹鳟鱼抗菌肽hepcidin基因及其片段，其如SEQ ID NO：1及SEQ ID NO：2所示。
2.一种虹鳟鱼抗菌肽的表达载体，其含有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的序列，所述表达载体为pGAPZαA-hep，具有图5所示的图谱；或pGAPZαA-mhep，具有图5所示的图谱；或pPICZαA-hep，具有图6所示的图谱；或pPICZαA-mhep，具有图6所示的图谱。
3.一种重组毕赤酵母菌株，GS115/pGAPZαA-hep或GS115/pGAPZαA-mhep，其含有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的序列。
4.一种重组毕赤酵母菌株，KM71H/pPICZαA-hep或KM71H/pPICZαA-mhep，其含有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的序列。
5.一种制备重组毕赤酵母菌株的方法，包括：
将SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示序列的基因经过XhoI酶及XbaI酶双酶切，可操作地连接质粒pGAPZαA或pPICZαA，得到质粒pGAPZαA-hep/mhep或pPICZαA-hep/mhep；
将质粒pGAPZαA-hep/mhep或pPICZαA-hep/mhep转化到毕赤酵母GS115或KM71H中，得到重组菌株GS115/KM71H/pGAPZαA/pPICZαA-hep或GS115/KM71H/pGAPZαA/pPICZαA-mhep。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述转化为电转化。
7.根据权利要求5所述的方法，其中重组菌株进行诱导表达的诱导时间为72h。
8.权利要求1所述的基因或其片段在抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鱼类致病菌如副溶血弧菌1.2164、维氏气单胞菌X-1-06909、嗜水气单胞菌HA-336、维氏气单胞菌CL0901活性中的应用。
9.权利要求2所述的表达载体pGAPZαA-hep、pGAPZαA-mhep、pPICZαA-hep或pPICZαA-mhep在抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鱼类致病菌如副溶血弧菌1.2164、维氏气单胞菌X-1-06909、嗜水气单胞菌HA-336、维氏气单胞菌CL0901活性中中的应用。
10.权利要求3或4所述的重组毕赤酵母菌株GS115/pGAPZαA-hep、GS115/pGAPZαA-mhep、KM71H/pGAPZαA-hep或KM71H/pGAPZαA-mhep在抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鱼类致病菌如副溶血弧菌1.2164、维氏气单胞菌X-1-06909、嗜水气单胞菌HA-336、维氏气单胞菌CL0901活性中的应用。
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