[发明专利]基于20个多重插入缺失遗传标记的法医学复合检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于法医遗传学应用领域，具体涉及基于20个多重插入缺失遗传标记的法医学复合检测试剂盒。

背景技术

法医遗传学通过对生物性检材进行DNA遗传标记的检测来实现亲子鉴定和个人识别。插入缺失多态性遗传标记(insertion/delection polymorphism，Indels)是由人类基因组单点突变产生，即基因组中特定碱基位置一定数量的核苷酸插入或缺失，造成DNA片段长度变化形成的多态性遗传标记。它在人类基因组中分布广泛，其分布密度仅次于单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNPs)。Indels和SNPs同属二等位基因多态性遗传标记，并且同样具有遗传稳定、突变率低、扩增片段小的特点，在帮助解决法医学亲子鉴定及个体识别中的突变疑难案例及腐败疑难检材的检测方面具有独特的优势。另一方面，插入缺失多态性遗传标记与短串联重复序列（short tandem repeats，STRs)一样，为DNA长度多态性，可采用与其相同的检测技术，因此与目前法医实验室通用的荧光标记检测技术完全共平台，易于在法医实验室中推广应用。由于插入缺失多态性遗传标记在法医物证学中有独特优势，因而成为该领域的研究热点，目前国外已有二个商业化试剂盒DIPplex kit30和38-Indel multiplex assay得以开发运用，它们分别能检测30和38个插入缺失多态性遗传标记。

然而，由于Indels和SNPs一样，是二等位基因，在识别力上存在局限性。二等位基因遗传标记的信息量与具有多等位基因的STR遗传标记差距较大，至少需要50-60个单基因座才能达到13-15个常用STR的累计个人识别率和非父排除率。而大量二等位基因遗传标记的复合扩增，不仅增加了检测成本，且大大增加了复合检测和数据分析的难度。并且二等位基因无法提示混合样本中多个来源个体的存在，无法用于混合样本的分析。

人类基因组中存在少数紧密相邻的Indel标记，若能将这些含有两个以上紧密相邻的Indel基因座人为地设计为一个多重插入缺失遗传标记，这种遗传标记将可能具有两个以上的等位基因，从而成为独特的多等位基因Indel遗传标记，其个体识别力及非父排除率能相应得以提高。由于多重插入缺失扩增产物中等位基因数量增加，则可以用相对少数的遗传标记获得较高的效能，达到效能提高而成本降低的目的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服单个Indel二等位基因遗传标记识别力不足的缺点，筛选由多个紧密相邻的二等位基因Indel多态性构成的具有多个等位基因的多重插入缺失遗传标记，运用这种相对较少的新遗传标记建立一个高效能的检测体系，为法医疑难亲缘关系鉴定和个人识别提供一种新工具。

本发明的技术方案是提供一种基于20个多重插入缺失遗传标记的法医学复合检测试剂盒，包括分离包装的复合扩增引物混合物、等位基因分型标准物混合物；所述复合扩增引物混合物，包含了20个多重插入缺失遗传标记的共计41条扩增引物；所述的等位基因分型标准物混合物由20个多重插入缺失遗传标记的等位基因分型标准物构成，包括63个荧光素标记DNA片段，对应20个多重插入缺失遗传标记的所有已知63个等位基因。

进一步的，所述的41条扩增引物的核苷酸序列如表3所示：

表3 41条扩增引物核苷酸序列

进一步的，所述等位基因分型标准物的核苷酸序列如表4所示：

表4等位基因分型标准物