[发明专利]施氏假单胞菌及其培养、固定化和应用

权利要求书

1.一株施氏假单胞菌，其特征在于，该菌株为施氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）WZUF25，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号为CGMCC NO.7685。

2.权利要求1所述施氏假单胞菌的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）保藏菌株WZUF25接种于LB培养基中，培养12 h以上，离心，得菌体，用无菌水洗涤后制成OD₆₈₀为0.900～1.000的菌悬液；

2）步骤1）所得菌悬液接种于反硝化培养基中进行培养；

其中，所述反硝化培养基的构成为：碳源，氮源，K₂HPO₄，FeSO₄，MgSO₄，H₂O，所述碳源为丁二酸钠、乙酸钠、甘油或葡萄糖，所述氮源为含硝酸根离子的化合物。

3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，步骤1）保藏菌株WZUF25接种于LB培养基中，于20～40℃，溶氧3.5～6.1 mg·L^-1的条件下培养；步骤2）中所得菌悬液接种于反硝化培养基中，于25~40℃，溶氧3.5～6.1 mg·L^-1下培养。

4.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，步骤2）中所述反硝化培养基的配方为：碳源，氮源中硝酸根的质量1.228g，K₂HPO₄ 1g，FeSO₄ ·7H₂O 0.20g，MgSO₄ ·7H₂O 0.10 g，H₂O 1000 mL，pH为 5~9，所述碳源与氮源的NO₃^-的质量比为5:1.228~15:1.228。

5.权利要求1所述的施氏假单胞菌的应用，其特征在于，将所述施氏假单胞菌WZUF25接种于含氮水溶液中，进行脱氮。

6.权利要求5所述的施氏假单胞菌的应用，其特征在于，所述含氮水溶液为含有NH₄⁺、NO₃^-和NO₂^-的一种或其组合的水溶液，所述施氏假单胞菌WZUF25脱NO₃^--N、NH₄⁺-N和NO₂^--N的碳源含有乙酸钠、丁二酸钠、甘油或葡萄糖的其中之一或其组合。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述含氮水溶液pH为4～10，所述施氏假单胞菌WZUF25于温度20℃～45℃，溶氧为1.3～7.3mg·L^-1的条件下对含氮水溶液进行脱氮。

8.权利要求1所述的施氏假单胞菌固定化制备微胶囊，其特征在于，步骤如下：

1）菌株WZUF25接种于LB培养基中培养后离心得菌体，菌体以蒸馏水洗涤，洗涤后的菌体与分散有活性炭粉末的海藻酸钠溶液混合；

2）配制CaCl₂水溶液中，于37℃水浴10~30min后，将步骤1）所得混合液滴加入温度37℃的CaCl₂水溶液中，得微胶囊。

9.权利要求8所述微胶囊的应用，其特征在于，所述微胶囊接种于含氮水溶液中，进行脱氮。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述含氮水溶液为含有NO₃^-或NO₂^-的一种或其组合的水溶液，所述固定化施氏假单胞菌WZUF25的微胶囊脱NO₃^--N、NH₄⁺-N和NO₂^--N的碳源含有乙酸钠、丁二酸钠、甘油或葡萄糖的其中之一或其组合。