[发明专利]迎阳报春组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种迎阳报春（Primula oreodoxa Franch)的组培快繁方法。

背景技术

迎阳报春(Primula oreodoxa Franch)是报春花科(Primulaceae)报春花属的多年生常绿草本植物。1886 年被发现，模式产地在我国四川峨眉山，分布于四川西北部(马边、峨眉、天全、宝兴、灌县) 等地，为四川特有种。自然条件下4～5月份开花，花葶高5-14厘米，直立，被长粗毛；伞形花序有3-10朵小花，花朵从上而下陆续开放，紫红色，十分艳丽，具有较高的观赏价值，可作盆栽、地被、花坛用花。由于在自然界条件下，该花所结种子粒细小而瘪，种子繁殖率低，生长周期长，且出苗不整齐，限制了该花的大面积种植，不能满足生产需求。组织培养是快速繁殖优良植物品种的一条重要途径，同属的鄂报春、灰岩皱叶报春、高穗花报春、小报春、滇北球花报春已有过组培方面的报道，而迎阳报春的组织培养在国内外均没有相关研究与报道，因此有必要开展迎阳报春的组织培养研究，并建立一套专门的快繁技术体系。

发明内容

鉴于上述不足之处，本发明的目的在于提供一种迎阳报春的组培快繁方法，提高迎阳报春的繁殖系数、缩短生长周期，能在较短时间内获得优质苗，为迎阳报春的种质保存、应用推广提供技术保障。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：

（1）对外植体的选择：

在现有对报春花的组培技术中，大部分采用腋芽、茎尖、花药和种子作为外植体，对原植株有较大的破坏作用，不仅会影响原植株的生长和发育，而且取材数量有限。

本发明所采用的外植体为叶片，采用叶片作为外植体对原植株不会造成破坏，且数量多。经过申请人的大量反复研究实验，得出采用叶片中下部（结合图1和图2所示）作为外植体对迎阳报春组培快繁效果最好，最早诱导出不定芽，且每个外植体平均能诱导出15-20个不定芽，显著高于叶片其他部位，其不定芽诱导率100%，平均根条数，苗高，移栽成活率均高于其他外植体。本发明采用的是2012年4月初采自四川峨眉山大乘寺附近（海拔2300米）迎阳报春植株的叶片，组培时将叶片中下部切割成长0.5厘米，宽0.5厘米的切片，叶背向下接种在诱导培养基上。

（2）再生途径的考量：

通过对现有技术中再生途径的研究发现：现有技术均是通过愈伤组织间接发生途径而获得再生植株，该再生植株易发生性状变异，成苗时间均较长，同时因为需要筛选愈伤组织诱导、增殖和分化的最佳培养基配方，同时也增加了试验成本。在此基础上，本发明在叶片上（特别是叶柄与叶片结合部位）直接诱导出不定芽，不需通过诱导愈伤组织、愈伤组织增殖、分化途径来获得大量再生植株。通过不定芽发生途径，不仅能稳定遗传性状，不会发生性状变异，还能缩短成苗周期，在2月内就能形成完整植株，只需4-5个月就可获得大批量的再生植株。

（3）植物激素配比选择：

通过对现有技术的对比，本申请人通过大量的创造性劳动，得出了如下结论：

本发明采用浓度较高的激素6-BA、NAA，在不定芽诱导阶段采用的6-BA为3.0 mg/L，NAA为0.5mg/L，而现有技术6-BA的浓度均在2.0 mg/L以下，NAA浓度在0.2 mg/L以下，在本试验中也使用过6-BA 1.0、2.0mg/L与NAA 0.1、0.2mg/L的配比，但是不定芽诱导效果没有在6-BA3.0 mg/L+NAA0.5mg/L的配比下好；生根培养基使用不添加任何激素的基本培养MS，生根率100%，且组培苗的生长势好。

（4）培养条件的筛选：

本发明的培养温度均为(20±2) ℃，光照时间12 h/d, 光照强度为2500-3000 Lux。当温度高于25℃，诱导不定芽的时间会延长，且芽苗、组培苗生长缓慢，叶片也会变黄，光照时间少于12小时,以及光照强度低于2500 Lux，组培苗表现为失绿、细弱现象，很难恢复成健壮苗。

本发明的具体技术方案为：

一种迎阳报春的组培快繁方法包括以下步骤：