[发明专利]犬细小病毒病毒样颗粒的制备及用途

权利要求书

1.犬细小病毒病毒样颗粒，其特征在于由VP2蛋白组成，其基因序列为SEQ ID №1。

2.权利要求1所述的犬细小病毒病毒样颗粒的制备方法，其特征在于以犬细小病毒DNA为模板，用SEQ ID №2和SEQ ID №3为引物扩增得到扩增产物，将扩增产物插入载体pSMK中，得重组质粒pSMK-VP2，将pSMK-VP2转化到大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIL株，在37℃，含卡那霉素（Kanamycin ）(50μg/mL) 和氯霉素（chloramphenicol）（34μg/ml）的LB培养基中培养重组大肠杆菌，以IPTG诱导表达重组蛋白，再将重组蛋白纯化后进行体外组装，得到犬细小病毒病毒样颗粒。

3.根据权利要求2所述的犬细小病毒病毒样颗粒的制备方法，其特征在于VP2重组蛋白纯化方式为亲和层析纯化。

4.根据权利要求3所述的犬细小病毒病毒样颗粒的制备方法，其特征在于将表达菌沉淀超声裂解后的上清转移至经buffer A（500mM NaCl、20mM Tris-HCl、20mM Imidazole、1mM DTT，pH=8.0）平衡的镍亲和层析树脂层析柱中，在室温条件下结合1h，之后用buffer A洗涤层析柱，目的蛋白用buffer B（500mM NaCl、20mM Tris-HCl、300mM Imidazole、1mM DTT，pH=8.0）洗脱，每次1ml，反复洗脱5-6次。

5.根据权利要求2或3或4所述的犬细小病毒病毒样颗粒的制备方法，其特征在于重组蛋白纯化后进行体外组装方法为：将重组融合VP2蛋白按质量比100:1加入sumo酶，再置于透析袋内，透析袋外部的缓冲液为150mM NaCl，50mM Tris-HCl，pH 7.0，组装时整个缓冲体系置于搅拌仪上，使缓冲液轻微搅动，得到犬细小病毒病毒样颗粒。

6.权利要求1所述的犬细小病毒病毒样颗粒在制备用于预防犬细小病毒引起疾病的疫苗中的应用。

7.权利要求1所述的犬细小病毒病毒样颗粒在制备用于检测犬细小病毒的检测试剂中的应用。