[发明专利]一种高效提取绿豆α-淀粉酶抑制剂的方法

权利要求书

1.一种制备绿豆α-淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：

a) 将脱脂绿豆粉在 35～50℃温度范围浸泡 4～20 小时，然后粉碎制成 100 目以下的细粉；经搅拌，12000g，4℃离心 30min 去渣；

b) 用凝胶柱 SephedexG-75 提取，即先以 HAc-NaAc 缓冲液平衡凝胶柱，再将步骤a) 离心后取得的上清液加入 HAc-NaAc 缓冲液至终浓度为 0.02mol/L，以 0.5mL/min 流速上样，再以 HAc-NaAc 缓冲液洗脱提取，收集蛋白峰并逐管测定淀粉酶抑制剂活性，收集活性峰洗脱液，与预先放置于-20℃的乙醇，按照 1 ∶ 1 ～ 1 ∶ 3 体积比混合，-20℃沉淀，提取时间即第一次 SephedexG-75 提取收集活性峰洗脱液与乙醇沉淀 -20℃放置的时间，范围为 1～2h；HAc-NaAc 缓冲液浓度为 0.02mol/L，pH 为 4.0；

c)12000g，室温离心 20min，去除上清液，清洗并减压干燥后制得α-AI 粗提品；

d) 将α-AI 粗提品溶于适量的 HAc-NaAc 缓冲液中，再使用 Sephedex G-75 凝胶柱，先利用 HAc-NaAc 缓冲液平衡凝胶柱，再将溶有α-AI 粗提品的 HAc-NaAc 缓冲液上样，流速为0.5mL/min，以 HAc-NaAc 缓冲液洗脱，流速为 0.5mL/min，得到一蛋白主峰，逐管检测淀粉酶抑制活性，进而收集活性峰，经透析、浓缩后减压干燥，获得α-AI；HAc-NaAc 缓冲液浓度为 0.02mol/L，pH 为 4.0。