[发明专利]一种替考拉宁的纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于化学领域，涉及一种纯化替考拉宁的方法。

背景技术

替考拉宁是继万古霉素之后开发的另一种抗耐药菌的糖肽类抗生素，其主要对革兰阳性需氧菌和厌氧菌具有较强的抗菌活性，特别是对MRSA所致感染有很好的疗效，是目前临床上为数不多的对多重耐药性金葡菌和肠球菌仍有抗菌活性的药物之一。与当前国际上公认的抗耐药菌抗生素万古霉素相比，替考拉宁具有与之相似的抗菌活性，相同的作用机制，相近或更优的临床疗效，而且毒性反应更低，特别是肾毒性更低，也不会发生使用万古霉素后引发的“红人综合征”。

替考拉宁是游动放线菌发酵生产的由多种成分组成的混合物，结构复杂，对热、酸、碱稳定性差，生产过程中容易引起失活和分解，且发酵液中替考拉宁的含量较低，一般都需要较复杂的分离纯化过程。目前公布的两项替考拉宁的纯化方法专利（专利号200710107185.6和20071016615.5）中提出了向替考拉宁浓缩液中添加丙酮进行结晶或盐析结晶的方法。但是该两项专利中提及的工艺繁琐，生产设备投入大，超滤浓缩会增加浓液杂质浓度，并且所使用的有机溶剂易污染环境，盐析结晶过程中还会容易包夹金属盐离子，引入杂质，降低样品纯度与效价。

真空冷冻干燥是先将湿料冻结到共晶点温度以下，使水分变成固态的冰，然后在较高的真空度下，使冰直接升华为水蒸气，再用真空系统中的水汽凝结器将水蒸气冷凝，从而获得干燥制品的技术。干燥过程是水的物态变化和移动的过程。这种变化和移动发生在低温低压下。因此，真空冷冻干燥的基本原理就是低温低压下传质传热的机理。     近年来，在西药制备方面，已有研究显示，利用该法制备某些药品，药品结构稳定，生物活性基本不变；药物中的易挥发性成分和受热易变性成分损失很少。例如，呋脲苄西林钠的合成中，使用冷冻干燥技术进行浓缩结晶，纯度达到86%，收率达到92.8%。在门冬酰胺酶的制备工艺中，通过使用冷冻干燥技术，得到了纯度、比酶活等指标符合《中华人民共和国药典2010年版》相关规定的结晶品。

但是，上述应用冷冻干燥技术进行结晶的技术，目前通常只限制用于相对较纯，例如纯度达到70%或以上的物质中，用以进一步提高纯度。对于存在较多干扰物质的物质，例如发酵液，目前尚没有任何相关的研究或报道。

发明内容

本发明的目的之一在于克服以上现有的技术的缺陷，提供一种工艺简便，经济，安全，低污染的替考拉宁制备方法。

本发明的另一目的在于提供得率进一步得到提升的高纯度替考拉宁的纯化方法。

为解决以上问题，本发明提供了一种替考拉宁的纯化方法，所述方法是将含替考拉宁溶液采用真空冷冻干燥法进行浓缩结晶。

该方法包括以下步骤：

S1. 将含替考拉宁溶液冷冻至-40℃～-45℃进行预冻；

S2. 抽真空，再加热至-12～-10℃进行升华干燥；

S3. 再加热至20℃～25℃进行解吸干燥，最终获得高纯度的替考拉宁。

优选地，S1所述冷冻是以38～42℃/h的速率降温，达到-40℃～-45℃后保温3～4h；作为更优选的方案，S1所述冷冻是以40℃/h的速率降温。

优选地，S2所述的抽真空是使压力到达8～15Pa。

优选地，S2所述的加热过程升温速率为6～8℃/h；升华干燥过程直至升华界面达到瓶底并消失，再保温2～4h之后结束。

    优选地，S3所述的加热是以8～10℃/h的速率进行升温，升温至20℃～25℃后再保温3～5h。

所述的含替考拉宁溶液可以是多种生产方法所获得的溶液，例如，该含替考拉宁溶液是游动放线菌发酵液经柱层析洗脱所得的洗脱液，进一步经活性碳处理后所得的溶液。

作为一种实施方案，替考拉宁的纯化方法如下：对含替考拉宁溶液浓缩结晶过程中采用真空冷冻干燥法。其中，真空冷冻干燥法在以38～42℃/h的冷冻速度进行预冻，样品达到-40℃～-45℃后保温3～4h，之后抽真空使压力到达8～15Pa时，以6～8℃/h的速率缓慢加热至-12～-10℃进行升华干燥，样品温度曲线重合，干燥层和冻结层的交界面到达盘底并消失再保温2～4h。之后以8～10℃/h进行加热解吸干燥，样品温度到达20℃～25℃后再保温3～5h。

冷冻干燥的结晶原理为：