[发明专利]一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗攻毒效检方法

权利要求书

1.一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗攻毒效检方法，所述方法包括：产毒素巴氏杆菌攻毒剂量的确定步骤，以及对仔猪免疫后攻毒效检步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法进一步包括攻毒菌毒液的制备步骤，所述攻毒菌毒液的制备步骤包括将支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌菌种分别于固体培养基平面活化，分别挑取所述支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌单克隆于培养基培养，收获菌液；对所述支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌菌液细菌计数，确定菌液活菌含量。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述支气管败血波氏杆菌为支气管败血波氏杆菌HN8株，所述多杀性巴氏杆菌为多杀性巴氏杆菌D型HB4株。

4.根据权利要求2所述的方法，其中，所述培养支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌单克隆菌株的培养基为固体培养基。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多杀性巴氏杆菌攻毒剂量的确定步骤包括通过多杀性巴氏杆菌对小鼠半数致死量确定多杀性巴氏杆菌对仔猪每鼻孔攻毒剂量。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述多杀性巴氏杆菌对仔猪每鼻孔攻毒剂量/多杀性巴氏杆菌对小鼠半数致死量为1～2×10³～1～2×10⁴。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述对仔猪免疫后攻毒效检步骤包括：在免疫组仔猪免疫二免后用支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏菌病毒混合液连同攻毒对照组仔猪进行鼻内攻毒，两个鼻孔同时攻毒；

最后一次攻毒后35日解剖仔猪，对仔猪鼻甲骨萎缩情况进行评分，攻毒对照组至少80%仔猪鼻甲骨萎缩分数在8分及以上，免疫组仔猪鼻甲骨萎缩平均分数比攻毒对照组仔猪鼻甲骨萎缩平均分数统计学上显著降低。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述仔猪免疫二免后第21天、第24天和第25天连续攻毒。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述攻毒菌液中含猪支气管败血波氏杆菌HN8株2.05×10⁹CFU/鼻孔，含多杀性巴氏杆菌D型HB4株2.2×10⁹～2.2×10¹⁰CFU/鼻孔。

10.根据权利要求7所述的方法，其中，所述仔猪7-10日龄首免，首免后14天进行二免。