[发明专利]一种真菌C2H2型锌指蛋白BbAzf及球孢白僵菌BbAzf的基因敲除载体有效
| 申请号： | 201310388680.4 | 申请日： | 2013-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN103421101A | 公开（公告）日： | 2013-12-04 |
| 发明（设计）人： | 范艳华;裴炎;唐桂荣;周永红;张永军 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C07K14/37 | 分类号： | C07K14/37;C12N15/31;C12N15/80;C12N15/66;C12N1/15;A01N63/04;A01P3/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 重庆博凯知识产权代理有限公司 50212 | 代理人： | 张先芸 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 真菌 c2h2 型锌指 蛋白 bbazf 球孢白僵菌 基因 载体 | ||
【权利要求书】：
1.一种真菌C2H2型锌指蛋白BbAzf，其特征在于，具有如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列和SEQIDNO.2所示的氨基酸序列。
2.一种球孢白僵菌BbAzf的基因敲除载体，其特征在于，通过破坏BbAzf基因以提高球孢白僵菌中卵孢素的产量，获得BbAzf的球孢白僵菌基因敲除子；
破坏该基因的方法，包括如下步骤：
1）以球孢白僵菌基因组作模板扩增得到BbAzf基因的左臂BbAzfL和右臂BbAzfR，亚克隆到pGEM-T上，获得pGEM-BbAzfL和pGEM-BbAzfR；
2）分别用XbaI/HindIII酶切pGEM-BbAzfR，EcoRI酶切pGEM-BbAzfL，回收BbAzfR和BbAzfL片段，分别构建进pk2-bar载体，得pk2-BbAzfL-bar-BbAzfR；
3）将pk2-BbAzfL-bar-BbAzfR转入根癌农杆菌LBA4404后，利用根癌农杆菌介导球孢白僵菌的遗传转化，并经PCR筛选获得基因敲除子。
3.如权利要求2所述球孢白僵菌基因敲除子，应用于治疗农林害虫的真菌杀虫剂。
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