[发明专利]一种中药组合物制剂中20种乌头碱类化合物的鉴别方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及中药活性成分的鉴别方法。

背景技术

该中药组合物由黄芪、附子、人参、丹参、葶苈子、泽泻、红花、玉竹、陈皮、桂枝、香加皮等十一味中草药。附子(Radix Aconiti Lateralis Preparata)是毛茛科乌头属植物乌头的干燥侧根，有毒，并具有镇痛、消炎、强心和抗癌等广泛的药理作用。二萜类生物碱是附子的主要化学成分，按取代基结构不同分为三类：单酯型生物碱(monoester-diterpenoid alkaloids)、双酯型生物碱(diester-diterpenoid alkaloids)和脂型生物碱(1ipo-alkaloids)，这些也有可能是该中药组合物的强心成分之一。前期对于该中药组合物的活性部位成分的研究中，并未对检出附子中的成分有所报道。

二萜类生物碱的结构

R₁=CH₃ or C₂H₅

R₂=H or OH

R₃=H or OH

R=CH₃COO(diester-diterpenoid alkaloids)

or OH(monoester-diterpenoid alkaloids)

or 甲酸tty acyl(lipo-alkaloids)

发明内容

本发明的目的是提供一种中药组合物制剂中20种乌头碱类化合物的鉴别方法。

本发明所采用的技术方案是：

一种中药组合物制剂中20种乌头碱类化合物的鉴别方法，所述中药组合物是由以下重量份的原料药制成：黄芪 150-450份、附子40-120份、人参或党参75-225份、丹参75-225份、葶苈子50-150份、香加皮或南五加皮60-180份、泽泻75-225份、玉竹25-75份、桂枝30-90份、红花30-90份、陈皮25-75份，该方法采用高效液相色谱法对组合物分离，用质谱对化合物进行鉴别，所述鉴别方法包括以下步骤：

A、样品溶液的制备：称取中药组合物制剂，用甲醇超声提取，离心，取上清液，加水，过SPE柱，再用甲醇洗脱，收集洗脱液，水浴吹干，以甲醇：水复溶，得到样品溶液；

B、液相色谱条件：流动相为甲醇和含0.1%甲酸的H₂O，流速：0.5ml/min；进样量为10μL；梯度程序：0-2min，90%含0.1%甲酸的H₂O，10%甲醇；2-13min，90-60%上午含0.1%甲酸的H₂O，10%-40%甲醇，13-19min，60-30%的含0.1%甲酸的H₂O，40%-70%甲醇，19-20min，30-0%含0.1%甲酸的H₂O，70%-100%甲醇；柱温40℃；

质谱条件：离子化模式为ESI，正、负离子扫描, 毛细管电压为3.5 kV, CE电压为45 V, 除溶剂气体为氮气, 除溶剂温度为550 ℃, 离子源温度为120℃，MS/MS mode-10 MS/MS at 80 ms each 50-1300 m/z，IDA，动态背景扣除开启；循环时间：1 秒；数据处理：PeakView^{SoftwareTM数据处理软件；}

C、成分鉴定：将乌头碱类化合物的分子式列表导入数据处理软件中的XIC Manager里，将分子式列表的精确质量数与计算的理论质量数对比筛选出符合的成分，根据二级质谱中的碎片信息分析化合物的裂解方式，鉴别出20个乌头碱类化合物。

作为优选方式，所述步骤A中甲醇为50-90%甲醇，水浴温度为40℃，甲醇：水为1:1，SPE柱为Waters Oasis HLB SPE小柱，3cc 60mg。

作为优选方式，所述步骤B中液相柱为Brownlee SPP液相柱，规格为2.7μm，2.1mm×100mm，氮气流速为900 L·h⁻¹。

作为优选方式，所述鉴别方法包括以下步骤：