[发明专利]一种色素三肽制备方法

权利要求书

1.一种色素三肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）降解藻蓝蛋白α-亚基或藻红蓝蛋白α-亚基：将藻蓝蛋白α-亚基或藻红蓝蛋白α-亚基，溶解于磷酸钾缓冲液中，用胰蛋白酶水解，得水解产物；

（2）粗提纯：将步骤（1）得到的水解产物加样于用稀盐酸平衡的凝胶层析柱，先用盐酸溶液洗脱无色肽和盐，最后用乙酸溶液回收色素肽；

（3）浓缩：将步骤（2）回收的色素肽经层析柱浓缩，用甲醇洗脱，收集洗脱液，去除甲醇，得到浓缩色素肽；

（4）高效液相色谱法制备色素三肽：将步骤（3）得到的浓缩色素肽通过高效液相色谱收集得到色素三肽样品；

（5）干燥：将步骤（4）收集得到的色素三肽样品干燥，得到色素三肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的藻蓝蛋白α-亚基或藻红蓝蛋白α-亚基溶解于磷酸钾缓冲液中的浓度是1 OD，所述胰蛋白酶浓度为1 mg/mL。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的磷酸钾缓冲液浓度为100 mmol/L，pH值为7.2。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的用胰蛋白酶水解的温度为 37℃，水解时间为3小时。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述的用于洗脱无色肽和盐的盐酸溶液pH值为2.5，所述的乙酸溶液是体积百分比浓度为30%的乙酸溶液。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（3）中所述的去除甲醇的方法为用惰性气体吹去甲醇，或者用真空浓缩洗脱液的方法去除甲醇。

7.根据权利要求1～6任一项所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中降解藻蓝蛋白α-亚基，步骤（4）中所述的高效液相色谱法的条件是：流速为1.0 mL /min；紫外检测器的检测波长为560nm；流动相包括溶液A和溶液B，所述溶液A为体积百分比浓度是0.1%、pH 值是2.0的甲酸，所述溶液B为含有体积百分比浓度是0.1%甲酸的乙腈；设定程序为时间分别为0分钟、2分钟、32分钟、35分钟、55分钟，溶液A和溶液B的体积比相应地分别为80:20、80:20、60:40、80:20、80:20，收集保留时间为16.4分钟的样品。

8.根据权利要求1～6任一项所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中降解藻红蓝蛋白α-亚基，步骤（4）中所述的高效液相色谱法的条件是：流速为1.0 mL /min；紫外检测器的检测波长为560nm；流动相包括溶液A和溶液B，所述溶液A为体积百分比浓度是0.1%、pH 值是2.0的甲酸，所述溶液B为含有体积百分比浓度是0.1%甲酸的乙腈；设定程序为时间分别为0分钟、2分钟、32分钟、35分钟、55分钟，溶液A和溶液B的体积比相应地分别为80:20、80:20、60:40、80:20、80:20，收集保留时间为13.3分钟的样品。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（5）中所述的干燥为将所述色素三肽样品在45℃下真空干燥。