[发明专利]一种联合检测早期卵巢癌标志物的抗体芯片试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种联合检测早期卵巢癌标志物的抗体芯片试剂盒。

背景技术

卵巢癌（EOC）是当今妇科恶性肿瘤死亡的首要原因，是中国妇女癌症死亡的五大最常见的原因之一。大多数卵巢癌的早期症状是微弱的，不像是会威胁到生命的身体变化。这些症状包括纳差、腹胀、骨盘不适、后背痛、早饱感、消化不良、恶心呕吐、排便习惯改变等。因此，大概80%的癌患者在晚期才诊断出卵巢癌。这个时期确诊的患者的五年存活率只有15-20%，而在早期阶段就能诊断出卵巢癌的患者的五年存活率能达到90%。因此迫切需要开发一种能在早期阶段就能检测出卵巢癌的生物标记物。

临床上采用酶标法对相关肿瘤标志物进行检测。酶标法就是将酶与抗原（抗体）结合，形成酶标物，与相应的抗体（抗原）反应形成免疫复合物。在一定的底物参与下，免疫复合物上的酶催化底物使其水解形成显色物质。酶的催化底物与显色程度成正比。因此可以定量测定样品中肿瘤标志物的含量。该技术需要离心机、孵育箱、酶标仪等实验设备，操作过程复杂。目前主要采用检测CA125肿瘤标记物的ELISA法检测卵巢癌，但单个指标的特异性不强，没有高通量的检测手段辅助诊断。

目前临床常用的检测方法是采用肿瘤标志物的检测试剂盒，存在操作复杂，重复，费时，费力，费钱等缺点。常规的ELISA一次只能从样品检测一个肿瘤标志物。对多个肿瘤标志物的检测用常规ELISA不止耗时耗力，而且需要许多病人的样品。同时，肿瘤标志物的特异性不强，不能检测出到底在哪个器官发生了恶性肿瘤，需借助超声波，核磁共振等物理方法配合检测以确定病变部位。

由于肿瘤的复杂性和异质性，一个生物标志物不可能有足够高的特异性和灵敏度来检测出疾病所有亚型和阶段。恶性肿瘤的发展是一个极其复杂的过程，其间有很多生物学上的变化（Hanahan and Weinberg,2000）。在分子水平上，这些生物学的变化是顺序遗传和表观遗传病变引起多种信号通路的基因表达模式改变的结果。另一方面，癌症是个体的疾病：患有同类型的癌症的不同病人可能会经历不同的疾病过程，且对同样的治疗有不同的临床反应。因此，从患有同样的癌症的不同病人很可能有不同的生物标志物分类。如果使用单一的生物标志物，很多患者将被错误诊断。因此，多个生物标志物或者一组生物标志物可能是不同癌症鉴别诊断的必要。此外，在早期阶段，生物标志物表达水平的变化是非常小的，所以多个生物标志物组合可能比单一指标有更多的预测能力。Lokshin博士的研究组（Molina et al.，2004）测定44例早期卵巢癌、45健康妇女、37例良性肿瘤患者血清中24个细胞因子和CA-125。其中，6个标志物包括IL-6，IL–8、表皮生长因子（EGF）、血管内皮生长因子（VEGF）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1的）和CA-125在卵巢癌和对照组血清中有显著性差异，84%灵敏度和95%特异性。此外，与其他6个生物标志物组合（CA-125、OPN、IGF-II、MIF、瘦素与泌乳素），Gil Mor’s的小组（Molina et al.，2004）成功开发出了一个血清生物标志物组合检测卵巢癌，具有95.3％的灵敏度和99.4％的特异性。

当前对于卵巢癌的诊断方法依赖于识别症状、活体结果和一个或多个血清蛋白标志物的检测，包括血清CA125、HE4、YKL-40、TATI、CEA和Tag-72。然而，这些标志物也只能检出40%的无症状病人。如果要对血清CA125、HE4、YKL-40、TATI、CEA和Tag-72等多种生物标志物进行检测，就需要多个试剂盒才能将所有的多种生物标志物检测完毕，每次反应只能检测一个指标，速度慢，效率低，费用昂贵，需要样本的量大。

当前使用最多的检测卵巢癌的方法是血清CA125表达水平与影像学的检测，但这两种方法即使同时采用也无法百分百诊断早期卵巢癌。比如，血清CA125在早期癌症患者中有大于98%的灵敏度，但只有50-60%的特异性。其它肿瘤生成，血清中CA125的表达水平也会升高。因此，就有较大一部分比例患有早期癌症的病人漏诊。此外，目前还缺乏针对卵巢癌的特异性治疗抗体。目前还没有批准用于卵巢癌诊断的试剂盒出现。

当前使用最多的方法是血清CA125表达水平与影像学的检测，但这两种方法即使同时采用也无法百分百诊断早期卵巢癌。比如，血清CA125在早期癌症患者中有大于98%的灵敏度，但只有50-60%的特异性。其它肿瘤生成，血清中CA125的表达水平也会升高。

发明内容