[发明专利]以盐类作为沉淀剂用于蛋白质结晶筛选的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于蛋白质结晶条件筛选的96条件盐类试剂盒。

背景技术

目前，对于蛋白质结晶条件的筛选，首要选择的盐类筛选试剂盒为Hampton Research公司的SaltRx-HT（96条件）盐类筛选试剂盒，具体成分见表1。它包括两部分：盐与pH矩阵缓冲区。盐是唯一利用的主要结晶试剂(沉淀剂)，而结晶盐浓度、pH值的盐的不同选择则是基于数据挖掘生物大分子结晶数据库（BMCD）和其他结晶数据库、结晶的报道文学,以及Hampton结晶实验室的研究工作，在此大量工作的基础上分析得到：多达35%的蛋白质结晶试剂盒涉及以盐作为主要结晶试剂。盐主要包括钠盐、铵盐、镁盐、钾盐、酒石酸盐等，其浓度范围从0.4M到6M；缓冲液仅仅包括3种，浓度为0.1M，pH范围从4.6到8.5；添加剂则没有选择任何试剂成分。

表1：SaltRx-HT96条件成分表

使用SaltRx-HT的96条件试剂盒对以下20种蛋白质进行结晶条件筛选研究，分别为溶菌酶、蛋白酶K、过氧化氢酶、伴刀豆球蛋白、甜味蛋白、核糖核酸酶I-A、核糖核酸酶III-A、核糖核酸酶XII-A、纤维素酶、枯草杆菌蛋白酶A、α-乳白蛋白、葡萄糖磷酸酶、木瓜蛋白酶、α-糜蛋白酶原、α-糜蛋白酶、肌红蛋白、α-淀粉酶、细胞色素C、血红蛋白、胃蛋白酶，统计得出其长出晶体的成功率仅为25%（5/20），结果发现SaltRx-HT对于大部分蛋白质（15/20）的筛选结晶条件无效，因此本发明尝试从结晶筛选试剂这一角度出发，试图寻找更适合蛋白质结晶的试剂条件，而组合成为一种新的高效的蛋白质结晶条件筛选试剂盒则显得十分必要。

SaltRx-HT的96条件试剂盒对溶菌酶、蛋白酶K、伴刀豆球蛋白、过氧化氢酶等几种蛋白进行了结晶条件筛选研究，统计出其筛选的成功率分别为：41.67%、40.63%、36.46%、34.38%。

但是SaltRx-HT的局限在于所用沉淀剂的组合是自由选取的，其浓度配比范围相对较低，这对蛋白质结晶筛选的成功率还存在提高的空间；所选缓冲区间以及添加剂的试剂种类过少，不利于提高蛋白质的溶解性和稳定性。

发明内容

为了克服现有技术在蛋白质结晶条件筛选中成功率低的不足，本发明提供一种以盐类作为沉淀剂，而且使用更加高效、全面的蛋白质结晶筛选盐类试剂盒，可以有效提高蛋白质结晶条件筛选的成功率。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：包括缓冲液、沉淀剂和添加剂，具体组成如下表所示：

本发明的有益效果是：①本发明设计的96条件盐类筛选试剂盒包含种类繁多的各种筛选试剂，20多种盐类的沉淀剂组合不仅在结晶成功率上高于目前市场上最为流行的SaltRx-HT盐类筛选试剂盒，而且获得的蛋白质单晶尺寸较大，形貌较好，晶体质量高；②本发明结合其特色设计合适的酸碱环境并选择了7种缓冲能力较强的缓冲液，使得pH范围尽可能地广泛，从4.0至9.0，覆盖了大部分蛋白质可结晶的pH区间，从而提高了结晶的成功率，增加了结晶的可能性；③本发明试剂盒所选沉淀剂的浓度相对较高，浓度范围从0.5M至7M，所选沉淀剂的种类也多达28种，可以有助于提高结晶筛选效率；⑤本发明可以为提高蛋白质结晶筛选的成功率提供一种有效途径。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进一步说明，本发明包括但不仅限于下述实施例。

本发明设计了一种用于蛋白质结晶条件筛选的96条件盐类试剂盒，该试剂盒是选择结晶效率较高的盐作为结晶试剂盒中的沉淀剂，同时加入一些添加剂分子以提高蛋白质的溶解性和稳定性来获得筛选效率高的盐类结晶试剂盒。