[发明专利]细交链孢菌酮酸的化学发光酶联免疫检测试剂盒及使用方法

权利要求书

1.一种细交链孢菌酮酸的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括包被有细交链孢菌酮酸抗原的化学发光酶标板、细交链孢菌酮酸标准品、细交链孢菌酮酸抗体、酶标抗抗体、化学发光液和洗涤液。

2.根据权利要求1所述的细交链孢菌酮酸的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的化学发光酶标板为96孔可拆不透明白色发光板，所述的细交链孢菌酮酸抗原为TeAHGA与OVA的偶联物，所述的细交链孢菌酮酸抗原的包被浓度为0.3μg/L。

3.根据权利要求1所述的细交链孢菌酮酸的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的细交链孢菌酮酸标准品的浓度为1mg/mL。

4.根据权利要求1所述的细交链孢菌酮酸的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的细交链孢菌酮酸抗体为细交链孢菌酮酸多克隆抗体，其原浓度为1mg/mL。

5.根据权利要求1所述的细交链孢菌酮酸的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的酶标抗抗体为辣根过氧化酶标记的羊抗兔IgG，其原浓度为10mg/mL。

6.根据权利要求1所述的细交链孢菌酮酸的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光液包括底物液和底物缓冲液，底物液为将20mg对碘苯酚、8mg鲁米诺、1.21gTris溶于100mL去离子水，用盐酸调pH至8.4得到；底物缓冲液为将体积分数0.40% H2O2、1.21gTris溶于100mL去离子水，用盐酸调pH至7.0得到；所述化学发光液为底物液和底物缓冲液按体积比1: 1的比例混合。

7.根据权利要求1所述的细交链孢菌酮酸的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的洗涤液为含有体积浓度0.5% Tween-20的pH7.4 0.4mol/L的磷酸盐缓冲液。

8.根据权利要求1至7任一所述的细交链孢菌酮酸的化学发光酶联免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于，

    S1. 将试剂盒置于15～35℃平衡30 min以上；将所述的细交链孢菌酮酸标准品溶液稀释成一系列的浓度梯度；

    S2. 取出化学发光酶标板，往标准孔中加入不同浓度的细交链孢菌酮酸标准品溶液，样品孔中加入待测样品，然后每孔加入细交链孢菌酮酸抗体，盖上盖板膜振摇混匀，孵育；

    S3. 吸除板孔中的反应液，加入洗涤液洗涤，将酶标板拍干；

    S4. 往各孔中加入酶标抗抗体，轻拍混匀，孵育；

    S5. 每孔加入化学发光液，轻拍混匀，盖上盖板膜，1～2min后用化学发光免疫分析仪测定各孔的发光值RLU；

    S6. 检测结果计算与分析，即得样品中细交链孢菌酮酸的含量。

9.根据权利要求8所述的细交链孢菌酮酸的化学发光酶联免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于，

    S1. 将试剂盒置于室温平衡30 min以上，用0.01 mol/L PBS将细交链孢菌酮酸标准品稀释成浓度分别为0.0、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3μg/L的细交链孢菌酮酸标准品溶液；

    S2. 取出化学发光酶标板，在标准孔加入50 μL不同浓度的细交链孢菌酮酸标准品溶液，样品孔加入50 μL待测样品，使用0.01 mol/L PBST将细交链孢菌酮酸单克隆抗体稀释32000倍，然后每孔加入50μL稀释好的细交链孢菌酮酸单克隆抗体，盖上盖板膜置于37℃ 孵育30 min；

    S3. 吸除板孔中的反应液，各孔加入洗涤液约300μL，静置20秒左右，除去其中液体，如此共洗5次，最后一次将板拍干；也可用自动洗板机洗板5次，洗完后将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的液体；

    S4. 使用0.01 mol/L PBS将辣根过氧化酶标记的羊抗兔IgG酶标抗抗体稀释5000倍，往各孔中加入100 μL稀释好的辣根过氧化酶标记的羊抗兔IgG酶标抗抗体，轻拍混匀后，置于37℃ 孵育20 min；

    S5. 每孔加入 100μL 底物液与底物缓冲液等体积混合后的化学发光液，轻拍混匀，盖上盖板膜，1～2min后用化学发光免疫分析仪测定各孔的发光值RLU，保存数据；

S6. 检测结果计算与分析，即得样品中细交链孢菌酮酸的含量。

10.根据权利要求8所述的细交链孢菌酮酸的化学发光酶联免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述的待测样品为液番茄或液面粉，其处理方法如下：

    液番茄：称取1g已匀浆的番茄样品于离心管中，除空白组外其它组直接添加2.5，10和20ng/g浓度水平的TeA，煮沸，使维生素C失活；加入2mL×2氯仿振荡萃取，以4000r/min离心10min，有机相加入10μL 98%水合肼，振荡反应30min后，减压蒸干溶剂，残余物用1mL PBS复溶，稀释一倍后，以4000r/min离心10min，吸取上清液进行检测；

    液面粉：称取1g面粉样品于离心管中，除空白组外其它组直接添加2.5，10和20ng/g浓度水平的TeA，然后加入5mL蒸馏水混匀，加入2mL×2氯仿振荡萃取，以4000r/min离心10min，有机相加入10μL 98%水合肼，振荡反应30min后，减压蒸干溶剂，残余物用1mL PBS复溶，稀释一倍后，以4000r/min离心10min，吸取上清液进行检测。