[发明专利]一种脂肪酶催化在线合成6″-O-棕榈酰-柚皮苷二氢查尔酮酯的方法

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种脂肪酶催化在线可控选择性合成6''-O-棕榈酰-柚皮苷二氢查尔酮酯的方法。

（二）背景技术

柚皮苷二氢查尔酮（Naringin dihydrochalcone）是将从天然柑橘类植物中分离提取得到的柚皮苷经过氧化而成的黄酮类衍生物，其甜度为蔗糖的500～700倍，其有高甜度、低热量、无毒、安全等特点，具有抗癌、抑菌、抗氧、降胆固醇等多种生物活性，因此应用于食品、医药和日化工业。除此以外，柚皮苷二氢查尔酮口感清爽，带有特别的清香，有着极佳的屏蔽苦味的作用，因此柚皮苷二氢查尔酮特别适用于蔬菜食品加工、果酱、口香糖、牙膏及口含药片中。

据研究黄酮类化合物的各种生物活性都是以抗氧化活性为基础的，与抗自由基或抗脂质过氧化有关。特殊的结构赋予它一系列独特的化学性质，如能与多种金属离子发生络合或静电作用，具有还原和捕获自由基的特性以及诸多衍生化反应活性等。黄酮类化合物抑制低密度脂蛋白LDL氧化和抑制类胡萝卜素及不饱和脂肪酸氧化的研究表明，苷元比糖苷具有更优秀的抗氧化活性。这是由于苷元亲脂性强，能嵌入生物膜疏水层的内核中发挥作用。黄酮苷类化合物的多羟基及糖基结构使其具有一定的亲水性，这势必会影响抗氧化活性。黄酮类化合物通过酯化修饰，在分子中引入长烃链可以增加它的脂溶性，从而增加和脂肪的相容性及提高抗氧化性。那么，柚皮苷二氢查尔酮作为应用最多的黄酮类化合物之一，研究开发其生理活性更强的柚皮苷二氢查尔酮脂肪酸酯必将具有良好的应用前景。

目前，柚皮苷二氢查尔酮脂肪酸酯的合成途径主要是在有机介质中进行酶促反应，对糖基上的羟基进行酰基化，具体包括酰化、酯化和酯交换反应三种方法。虽然酶促反应有反应条件温和，选择性好的优点，但是酶催化反应也存在一些局限性，比如酶的活性与有机溶剂的极性之间的制约，有机溶剂的极性与反应底物的溶解性之间的制约，反应时间较长、转化率不高等技术瓶颈。因此，寻找柚皮苷二氢查尔酮酶促选择性酯化新技术对于发展柚皮苷二氢查尔酮脂肪酸酯的生产具有重要意义。

微流控学(Microfluidics)是在微米级结构中操控纳升至皮升体积流体的技术与科学，是近十年来迅速崛起的新交叉学科。当前，微流控学的发展已大大超越了原来的主要为分析化学服务的目的，而正在成为整个化学学科、生命科学、仪器科学乃至信息科学新一轮创新研究的重要技术平台。

自1997年Harrison课题组发表了首篇在微流控芯片微反应器中合成化合物的文献后，微流控芯片反应器已成功地用于多种有机合成反应，并展示了广泛的应用前景。随着微流控芯片中微混合、微反应技术的发展，在芯片中进行合成反应已经成为微流控芯片领域的研究热点之一。

同常规化学反应器相比，微通道反应器不仅具有使反应物间的扩散距离大大缩短，而且传质速度快；反应物配比、温度、反应时间和流速等反应条件容易控制，副反应较少；需要反应物用量甚微，不但能减少昂贵、有毒、有害反应物的用量，反应过程中产生的环境污染物也极少，是一种环境友好、合成研究新物质的技术。

目前，有较多的国内外学者对有机介质中黄酮类化合物的酶促区域选择性酯化进行了研究，但是针对柚皮苷二氢查尔酮的酶促改性的研究还没有。并且已报道的有机介质中黄酮类化合物的酶促区域选择性酯化方法往往需要较长的反应时间（24h），且反应的转化率与选择性不高，利用微流控技术探索新的合成反应，用以解决现有合成方法的技术瓶颈是当今国际国内的研究热点。我们研究小组前期也对微流控反应器中糖类化合物的酶促选择性合成进行了系统研究，发现利用微流控技术进行糖类化合物的酶促选择性合成具有一定的可行性。而柚皮苷二氢查尔酮是将从天然柑橘类植物中分离提取得到的柚皮苷经过氧化而成的黄酮类衍生物，具有良好的抗癌、抑菌、抗氧化、降胆固醇、降低毛细血管脆性、改善微循环等多种生物活性。对柚皮苷二氢查尔酮的区域选择性酯化修饰不仅可以提高生物利用率，还可以拓展其在医药、食品等领域的应用。并且柚皮苷二氢查尔酮是一类含糖黄酮类衍生物，我们可以利用前期的研究基础对柚皮苷二氢查尔酮的酶促区域选择性酯化进行研究。因此我们研究了微流控通道反应器中脂肪酶催化选择性合成6''-O-棕榈酰-柚皮苷二氢查尔酮酯的方法，旨在寻找一种高效环保的柚皮苷二氢查尔酮棕榈酸单酯的在线可控选择性合成方法。由于不同链长取代的柚皮苷二氢查尔酮单酯，其溶解性，细胞渗透性等有很大不同，因而利用微流控技术合成不同链长取代的柚皮苷二氢查尔酮单酯类化合物，可以深入研究其生物利用度，拓展其在医药和食品等领域的应用。

（三）发明内容