[发明专利]利用粗毛韧革菌菌体作为催化剂制备银杏内酯B的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，通过粗毛韧革菌菌种液体培养，同时转化银杏叶提取物制备银杏内酯B的一种新工艺。

背景技术

研究证明银杏内酯是银杏叶中主要的活性成分之一，是一类特异有效的血小板活化因子(Platelet activating factor PAF)受体拮抗剂。血小板活化因子是由血小板和多种炎症组织分泌产生的一种内源性磷酯，是目前发现的最有效的血小板聚集诱导剂，与许多疾病的产生、发展密切相关。银杏内酯作为PAF受体特异性拮抗剂，具有广泛的药理作用。研究发现银杏内酯B对中枢神经系统与缺血损伤有保护作用，抗休克、抗过敏、抗菌抗炎作用，以及抗器官移植中的排斥反应。同时还发现银杏内酯B可降低肝门静脉压提高全身血管耐受性，说明它对肝硬化有一定的疗效。银杏内酯对于肾损伤有治疗作用。这些作用都与银杏内酯B作为PAF受体拮抗剂有关，并且它目前被认为是作用最强的、最有临床应用前景的天然血小板活化因子(PAF)受体拮抗剂。

目前国内外生产银杏内酯B的方法主要是从银杏叶提取物，已见报导的银杏内酯B的专利共有51篇，其中一部分是关于银杏内酯B的制剂的制备(如：一种银杏内酯B固体分散体及其制备方法，申请号：CN200910204198.4)，三篇关于银杏内酯B及其衍生物的生理学功能(银杏内酯B的一种新用途；申请号：CN200910092750.5；银杏内酯B衍生物在制药中的新用途，申请号：CN200910234319.X；银杏内酯B水解衍生物及其用途，申请号：CN201010122039.2)。而关于银杏内酯B的制备只有九篇(一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的新方法，申请号200510063407.X；一种从银杏内酯混合物中分离银杏内酯B的方法，申请号：CN201010608847.X，等等)，银杏内酯中含有银杏内酯A、B、C、M等同系物，这些专利是采用分离技术从银杏内酯混合物中分离银杏内酯B，难以在工业上大批量生产银杏内酯B。

发明内容

本发明提供的是一种银杏内酯B的生产技术，该技术不是单纯的利用分离提纯方法获得大量的银杏内酯B，而是在培养基中添加银杏内酯，以粗毛韧革菌(Stereum hirsutum)为菌种通过液体培养技术得到菌体，菌体作为催化剂，转化银杏内酯A、C和M生成银杏内酯B，以及通过提取步骤获得银杏内酯B制品。

本发明一方面涉及一种银杏内酯B的生产技术，其特征在于包括如下步骤：

在银杏内酯(包括银杏内酯A、B、C和M)加入蒸馏水和酸，调节pH6.0-7.0，配成20-30克银杏内酯／升的反应液，将粗毛韧革菌和反应液按照重量／体积1：20-30混合，在温度20-30℃，搅拌速率100-150转／分钟，反应10小时以上；

反应之后的反应液按照4000-6000转／分钟离心10-20分钟去除菌体，滤液用盐酸或硫酸调节pH2.0-3.0，连续用乙酸乙酯萃取2-4次，合并乙酸乙酯萃取液，真空浓缩至干，残渣用无水乙醇溶解，过滤，滤液至于-20℃以下结晶70小时以上，过滤，滤渣水洗，干燥得到银杏内酯B。