[发明专利]一种实时荧光RT-PCR检测人星状病毒的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种人星状病毒的RT-PCR检测试剂盒，该试剂盒包括：RNA提取试剂，RT-PCR扩增反应液，阴性质控品，阳性质控品，人星状病毒阳性标准品。

2.权利要求1所述的试剂盒，其中，所述的RT-PCR扩增反应液包含有能与双链靶多核苷酸的第一条链特异性结合的正向引物HAstV-F、能与双链靶多核苷酸的第二条链特异性结合的反向引物HAstV-R、能与靶多核苷酸特异性结合并且两末端分别结合有荧光报告集团和荧光猝灭集团的寡核苷酸探针HAstV-P中任意一种或一种以上的组合。

3.权利要求2所述的试剂盒，其中：

所述正向引物HAstV-F的序列为：5′-CCCTCTCCGGTCCGTGAT-3′；

所述反向引物HAstV-R的序列为：5′-CTCATATTGACGACACCCGTC-3′；

所述寡核苷酸探针HAstV-P的序列为：5′-GTCTGAAACTGCTAACCTTGGGCACCTA-3′；

或包含有上述序列的向5’端和/或3’端延长的序列；或与上述序列同源性大于85％的序列；或上述序列的碱基互补序列；或使用上述所有序列中的任意一种或一种以上的组合。

4.权利要求1-3任一所述的试剂盒，其中，所述的RT-PCR扩增反应液还包括DNA聚合酶、逆转录酶、RNA酶抑制剂、dNTPs和PCR buffer；其中，DNA聚合酶为Taq DNA聚合酶，其最佳浓度为5U/反应；逆转录酶的最佳浓度为100U/反应；RNA酶抑制剂的最佳浓度为20U/反应；dNTPs最佳浓度为0.2mmol/L/反应。

5.根据权利要求2-4任一所述的试剂盒，其中，正向引物和反向引物的最佳浓度为1umol/L，寡核苷酸探针的最佳浓度为0.5umol/L。

6.根据权利要求1-5任一所述的试剂盒，其中，所述试剂盒的反应条件为：37℃60min，94℃5min；PCR反应条件为94℃5min；94℃10s，60℃30s，72℃1s，共30个循环。

7.根据权利要求1-6任一所述的试剂盒，其特征还在于：检测样本选自大便样品、肛拭子、含大便样品或肛拭子的抽提液或培养上清液。

8.一种用于检测人星状病毒的寡核苷酸组合物，所述组合物包含1)-4)中任一个：

1)正向引物HAstV-F，其序列为：5′-CCCTCTCCGGTCCGTGAT-3′；

2)反向引物HAstV-R，其序列为：5′-CTCATATTGACGACACCCGTC-3′；

3)寡核苷酸探针HAstV-P，其序列为：5′-GTCTGAAACTGCTAACCTTGGGCACCTA-3′；

4)1)-3)中一个或多个序列的组合，或包含有上述序列的向5’端和/或3’端延长的序列；或与上述序列同源性大于85％的序列；或上述序列的碱基互补序列；或使用上述所有序列中的任意一种或一种以上的组合。

9.权利要求8所述的寡核苷酸组合物在制备检测人星状病毒的试剂中的应用。

10.权利要求9所述的应用，其中所述试剂为用于RT-PCR的试剂。