[发明专利]Citrin缺乏症的基因诊断试剂及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种Citrin缺乏症的基因诊断试剂及其应用。

背景技术

Citrin是一种线粒体内钙结合天冬氨酸/谷氨酸载体(Aspartate/Glutamate Carrier,AGC)蛋白，在尿素循环及其他代谢过程中发挥重要作用。Citrin缺乏症包含成年发作Ⅱ型瓜氨酸血症(Adult Onset TypeⅡCitrullinemia,CTLN2)和Citrin缺乏所致新生儿肝内胆汁淤积症(Neonatal Intrahepatic Cholestasis caused by Citrin Deficiency,NICCD)两种不同表型，为常染色体隐性遗传。Citrin缺乏症对应基因SLC25A13基因突变杂合子携带率在东亚各国常见，日本1/69，中国1/79，韩国1/50。发病率约为1/17,000-34,000（J Inherit Metab Dis.2007Apr；30(2):139-44.Mol Aspects Med.2013Apr-Jun；34(2-3):465-84.）。

Citrin缺乏症可以通过食物、药物治疗和手术治疗。其预后除与疾病本身严重性有关外，早期诊断、早期治疗对改善疾病预后有重要作用（Mol Genet Metab.2013May；109(1):9-13.）。

目前Citrin缺乏症的诊断主要依赖于临床生化检测和基因检测。确定基因型的方法主要采用突变热点的基因测序技术。日本使用常规新生儿半乳糖和氨基酸筛查外结合SLC25A13基因突变测序。生化筛查结合基因测序检测技术对样本要求高，技术设备较复杂，检测需要较长时间，费用较高，难于大规模开展（《中华医学遗传学杂志》2006年第6期655-658；BMC Med Genet.2013Feb10；14:24.doi:10.1186/1471-2350-14-24.）。最近有研究人员试图用HRM技术筛选Citrin缺乏症所涉及的几个基因突变取得了一定成功，但是相应仪器普及性有限，并且该仪器检测目前还没有获得SFDA认证。

SLC25A13基因突变筛查结果显示有50多种突变可引起蛋白功能异常，其中851del4(20%)、S225X(25%)、IVS11+1G﹥A（45%）在日本人中常见；851del4(70%)和IVS6+5G﹥A（23%）在中国人中常见（《中华医学遗传学杂志》2006年第6期655-658；《中华医学遗传学杂志》2012年第2期:167-71）。在该背景条件下，开发基于主要突变位点的基因检测方法的前提下，开展基于Taqman探针的定量PCR检测有望方便、可靠地检测相应基因突变。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Citrin缺乏症的基因诊断试剂及其应用，以解决现有技术中存在的问题。本发明提供的Citrin缺乏症的基因诊断试剂可以在具有定量PCR的实验室完成，检测时间仅仅需要3到5个小时；可以在单个实验室全闭管完成，可避免高浓度模板污染。

一种Citrin缺乏症的基因诊断试剂，采用Taqman MGB探针定量PCR技术，用于检测Citrin缺乏症基因SLC25A13的9个突变位点中的一个或多个突变位点；所述Citrin缺乏症的基因诊断试剂包括基因片段特异性扩增引物和位点特异性Taqman MGB探针序列。

其中，所述9个突变位点所对应的9个Citrin缺陷突变基因，其核苷酸序列分别如c.615+5G>A(IVS6+5G>A)（SEQ ID No.1），c.851_854del(851del4)（SEQ ID No.2），c.1177+1G>A(IVS11+1G>A)（SEQ ID No.3），c.1750+72_1751-4dup17ins(IVS16ins3kb)（SEQ ID No.4（J Hum Genet：（2008）53：534-545）），c.615+1G>C(IVS6+1G>C)（SEQ ID No.5），c.1311+1G>A(IVS13+1G>A)（SEQ ID No.6），c.550C>T R184X（SEQ ID No.7），c.674C>A S225X（SEQ ID No.8），c.1078C>T R360X（SEQ ID No.9）所示。