[发明专利]重组人血清白蛋白-干扰素α融合蛋白的水溶液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种稳定的重组人血清白蛋白-干扰素α融合蛋白的水溶液，属于生物制剂技术领域。

背景技术

干扰素属于蛋白质家族的细胞因子，自然存在于人体中。细胞因子可控制细胞的生长、激活、迁移和衰老。干扰素α也是一种细胞因子，但干扰素α（IFNα）准确的作用机制尚不十分清楚，研究表明IFNα具有抗病毒活性如治疗丙型肝炎，同时具有免疫调节和针对特定的癌症具有直接的抗肿瘤效应。IFNα已成为临床上广泛应用的药物之一，可治疗人的病毒性肝炎（乙型和丙型）、肿瘤和其它病毒感染等相关疾病。然而，IFNα分子量约为19KD，作为一个小分子蛋白，IFNα从血浆中清除的速度较快，其半衰期为4～6h，24h后在血浆中就已检测不到IFNα的存在，患者需要每日注射1次或每周3次，疗程长达4～6个月。这种长期大剂量频繁用药增加了病人的痛苦和治疗费用，而且易产生发烧、疲乏、食欲减退及抑郁等毒副作用。

为了延长IFNα在体内的半衰期，广泛采用的是聚乙二醇修饰法，目前已有40KD左右聚乙二醇修饰的IFNα2a（派罗欣，罗氏公司）和12KD左右聚乙二醇修饰的IFNα2b（佩乐能，先灵葆雅）应用于临床。这两种产品均可明显延长IFNα在体内的半衰期，患者只需每周注射1次。

近年来，研究较热的是重组人血清白蛋白-干扰素融合蛋白。人血清白蛋白（HSA）是存在于人循环系统中的最普遍的血液蛋白，它是体内因子和药物转运的天然载体，半衰期约为19天。研究表明将治疗性蛋白基因与人血清白蛋白基因融合所表达的融合蛋白可明显降低体内药物的清除速率，延长生物半衰期。白蛋白-干扰素融合蛋白是人血清白蛋白和干扰素α基因融合的产物。HGS公司（人类基因科学公司）开发的克鲁维氏酵母表达的HSA-IFNα2b的融合蛋白(albuferon)在猕猴体内的半衰期比单独的IFNα延长了大约18倍，即重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白在体内的半衰期长达148h左右，仅需每2～4周注射一次，被称为最长效的干扰素。研究表明，它比聚乙二醇修饰的干扰素显示出更强的抗病毒活性，目前正处于III期临床阶段。国内目前在研的也有重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白和重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白，简称HSA-IFNα2a和HSA-IFNα2b。

重组人血清白蛋白-干扰素融合蛋白比普通干扰素的稳定性有所提高，但作为蛋白类药物，其稳定性还是无法与常规化学药物相比。根据以往的重组干扰素临床使用经验，在治疗病毒性肝炎等疾病需要3～6个月的连续给药周期。因为给药时间较长，活性药物需要有较好的稳定性。众所周知，一般重组蛋白质的稳定性比较差，在保存过程中会受到多种环境因素的影响，例如温度、湿度、氧、光照和紫外线等都可能使蛋白发生多种物理或化学变化，造成蛋白质的聚集、降解、氧化或变性等。这些变化使蛋白质活性丧失从而降低治疗效果，并且严重的可能引起毒副作用。因此，研究出一种能稳定保存的重组人血清白蛋白-干扰素α融合蛋白，并适合于实际临床使用的制剂处方是很有意义的。

中国专利CN101099722A（申请号200610052365.4）公开了一种含有重组人血清白蛋白-干扰素α融合蛋白的注射用水剂，所述注射用水剂由重组人血清白蛋白-干扰素α融合蛋白与药学上可接受的稳定性辅料溶于pH5～8的药学上可接收的缓冲液中得到，所述重组人血清白蛋白-干扰素α融合蛋白浓度为0.1～5mg/ml，所述的稳定性辅料为甘氨酸或甲硫氨酸。中国专利CN101234193A（申请号200810033915.7）公开了一种重组人血清白蛋白融合干扰素的稳定水溶液，含有磷酸盐和焦亚硫酸钠、L-抗坏血酸、半胱氨酸等还原性物质，pH为6.5～7.5。但根据这两个专利申请公开的技术方案制备的制剂的稳定性仍有待提高。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种能稳定保存的重组人血清白蛋白-干扰素α融合蛋白的水溶液，该水溶液能够充分防止重组人血清白蛋白-干扰素α融合蛋白的聚集、降解、氧化或变性等，从而保持其有效组分的生物学活性，适合于临床使用。

发明概述