[发明专利]人尿路上皮癌特异性抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤免疫学领域。具体地说本发明涉及一株抗人尿路上皮癌TNFRSF25的单克隆抗体DTUC1。该抗体能够在生化、细胞核组织水平特异性识别人尿路上皮癌TNFRSF25。本发明还涉及一种双抗夹心酶联免疫吸附检测人尿路上皮癌的方法。这种检测方法中的固定相为B‐8抗体（购自Santa Cruz Biotechnology,Inc.），检测抗体是本发明中的DTUC1，用于检测尿液中肿瘤标记物TNFRSF25含量。 

背景技术

尿路上皮癌是指覆盖尿路的上皮细胞发生的肿瘤，包括膀胱尿路上皮癌、输尿管尿路上皮癌和肾盂尿路上皮癌，它们占泌尿系统肿瘤的绝大部分，其中膀胱尿路上皮癌占膀胱癌发生率的90%以上[1]。对尿路上皮肿瘤的诊断，膀胱镜或输尿管镜加病理活检是金标准，但由于膀胱镜或输尿管镜为有创性检查且敏感度不高，对尿路上皮肿瘤的早期诊断和术后监测帮助不大[2]。尿脱落细胞镜检是一种无创的检查，特异度较高，但是敏感度较低，对于尿路上皮肿瘤的早期诊断和术后监测帮助有限[3]。人们一直在寻找一些无创的，敏感度和特异度均高的检查指标来辅助尿路上皮肿瘤的早期诊断和术后监测[4]。 

TNFRSF25又名“死亡受体DR3”（Death Receptor3）发现于1996年,为肿瘤坏死因子受体超家族（TNFR super family）中的一员,基因定位在lp36.3，其编码产物为一种11型跨膜蛋白，大小为417个氨基酸，与该家族中其他蛋白类似，其胞质区同样具有一段有蛋白水解功能的氨基酸残基段，即死亡结构域（Death domain），并且与TNFR‐1以及Fas存在高度同源性，通过此区域可使得凋亡信号向通路下游继续传递，继而启动调亡而TNFRSF25同时还可激活NF‐κB的表达，从而使NF‐κB进入细胞核内,激活转录[5]。因其被发现时主要分布于淋巴组织中，如脾脏、胸腺以及外周血淋巴细胞，包括淋巴细胞、NK 细胞、巨噬细胞等中[6‐8]，故对其的最初研究多为在免疫调节机制中的作用，并且己证实TNFRSF25可以促进多种炎症性疾病的发生及发展，如炎症性肠病、关节炎等[8‐11]。随着研究的深入，逐渐证实TNFRSF25在多种肿瘤组织中亦有分布[12‐15]。但在尿路上皮癌中，TNFRSF25的高表达鲜有报道。 

在尿路上皮癌的诊断中，早期发现和预后判断对临床治疗显得极为重要。近年来用于临床的分子标记，如核基质蛋白、端粒酶和微卫星不稳定性等，其灵敏度或特异性不能令人满意。所以，寻求有效、简便、快速、灵敏的尿路上皮癌的高通量诊断方法是非常必要的。 

发明内容

本发明利用人尿路上皮癌组织匀浆免疫小鼠，获得杂交瘤细胞。用ELISA的方法筛选到一株能与人尿路上皮癌组织高度特异结合的抗体DTUC1。免疫组织化学和流式细胞术证实，DTUC1抗体与人尿路上皮癌组织和尿路上皮癌细胞系5637、UMUC3、SW780、J82、T24和RT4呈强阳性反应，而与人正常尿路组织和其它非尿路上皮癌细胞无交叉反应。 

本发明还涉及一种双抗夹心酶联免疫吸附检测人尿路上皮癌的方法。这种检测方法中的固定相为B‐8抗体（购自Santa Cruz Biotechnology,Inc.）检测抗体是本发明中的DTUC1。 

本发明利用DTUC1抗体制备成诊断试剂，即将B‐8抗体（购自Santa Cruz Biotechnology,Inc.）作为固定相，DTUC1抗体检测尿液中肿瘤标记物TNFRSF25含量。 

本发明的创新点在于：（1）研制了一株抗人尿路上皮癌的鼠单克隆抗体DTUC1，该组抗体能特异性地结合人尿路上皮癌组织；（2）开发了一种高灵敏度的双抗夹心酶联免疫吸附方法，用于人尿液中尿路上皮癌肿瘤标记物TNFRSF25的检测。 

发明详述 

本发明提供了一个新的抗人尿路上皮癌TNFRSF25的单克隆抗体的杂交瘤细胞，及其分泌的单克隆抗体DTUC，DTUC1识别TNFRSF25的抗原表位。DTUC1抗体与人尿路上皮癌组织及人尿路上皮癌细胞系5637、UMUC3、SW780、J82、T24和RT4呈强阳性反应，而与人正常尿路组织和其它非尿路上皮癌细胞无交叉反应。本发明还提供了包含单克隆抗体DTUC1体外诊断试剂盒和使用单克隆抗体DTUC1检测尿液中尿路上皮癌肿瘤标记物含量的方法。 

本发明的另一个目的是提供一种用于检测或治疗人尿路上皮癌的试剂盒，其包含本发明上述的抗体。