[发明专利]碳纳米粒子修饰电极电化学发光测定博来霉素的方法

权利要求书

1.碳纳米粒子修饰电极电化学发光测定博来霉素的方法，其特征包括以下步骤：

a 将0.1~1.0 g聚乙烯醇溶解在10 ml水中制得均相溶液，然后放入微波炉（600 W）加热15 min（分钟）至溶液颜色改变，将上述溶液以13000 rpm离心30 min去除杂质，得碳纳米粒子；将0.1~2.0克碳纳米粒子与0.5 mL 63%的硝酸和0.5 mL二甲基甲酰胺混合后在100摄氏度下反应8小时（h）；

b 将200 μL 2 OD DNA加入200 μL 1.0×10^-3 mol/L Ru(bpy)₂(dcbpy)NHS（二(2,2'-联吡啶) (2,2'-吡啶-4,4'-二碳酸)琥珀酰胺钌），室温下振荡6~18 h，随后，在该溶液中加入100 μL 3 mol/L 醋酸钠和2.0 mL 冷无水乙醇，溶液在-16 ℃冷却24 h，然后在12000转速和-4 ℃下离心30 min，沉淀物用1 mL冷乙醇清洗三次，除去未反应的Ru(bpy)₂(dcbpy)NHS，得Ru(bpy)₂(dcbpy)NHS标记的DNA探针（电化学发光探针）用1.0 mL 0.10 mol/L 磷酸缓冲溶液溶解；

c 金电极经1.0 μm，0.3 μm，0.05 μm的α-A1₂O₃抛光粉抛光后，用二次蒸馏水冲洗干净，并在超声波水浴中超声5 min，用高纯氮气吹干，备用；将处理好的金电极浸入100 μL（10^-4 M）的巯基乙胺中，固定2~8 h（37℃）后，用磷酸缓冲溶液冲洗二次，取1 mL羧基化碳纳米粒子溶液，加入N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）3.6 mg、1-（3-二甲氨基醛）-3-乙基二亚胺盐酸盐（EDC）7.2 mg，在37 °C下活化1 h，再将上述电极浸入其中，反应过夜，制得碳纳米粒子修饰电极，利用DNA与探针与碳纳米粒子修饰电极之间的静电斥力和π-π堆积作用之间的竞争作用，得碳纳米粒子修饰电极电化学发光生物传感器。

2.利用权利要求1所制备的碳纳米粒子修饰电极电化学发光生物传感器测定博来霉素的方法，其特征包括以下步骤：

在100 μL电化学发光探针中加入不同浓度的博来霉素溶液和0.1 mM Fe²⁺，然后将修饰电极浸入其中反应7 min，用10 mM的磷酸缓冲溶液（pH 7.4）冲洗电极三次，然后进行电化学发光测定，根据作用后电极表面电化学发光探针所产生电化学发光信号，对博来霉素进行定量检测。

3.根据权利要求2所述的电化学发光测定具体为：采用三电极系统检测，工作电极为金电极，对电极为铂丝电极，参比电极为Ag/AgCl电极，参数设置为：高压800 V，放大级数为3，控制电位为0-1.30 V。

4.根据权利要求1所述，其特征在于： DNA部分序列为5'-CGCTTTAAAAAAAGTG-(CH₂)₆-NH₂-3'。

5.根据权利要求1所述，其特征在于： DNA部分序列为3'末端为氨基修饰。