[发明专利]一种测定Lambda游离轻链浓度的试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种测定Lambda游离轻链浓度的试剂盒及方法。

背景技术

免疫球蛋白（Ig）轻链分为κ（kappa）和λ（lambda）2个型别，每个Ig分子上只有一个型别的轻链，人类κ（kappa）和λ（lambda）的比例为6：4。轻链为能自由通过肾小球基底膜的小分子蛋白质，在肾小管被重吸收回到血液循环中，所以正常人尿中只有少量轻链存在。当人体发生代谢失调和多发性骨髓瘤时，血液中出现大量游离轻链，并由尿中排出，即为Bence-Jones蛋白（本周蛋白）。在正常人体内，血清κ型游离轻链为3～19mg/L，λ型游离轻链为6～26mg/L，κ/λ比值为0.26～1.65。异常情况的κ型游离轻链以及和κ/λ比值、或异常λ型游离轻链和κ/λ比值、或同时三者均异常等情况，对单克隆性γ球蛋白增多症（monoclonal gammopathies,MGP）的敏感性为88%～98%；对非分泌性骨髓瘤（nonsecretory myeloma,NSM）的敏感性为65%～70%，有助于单克隆轻链病、AL-淀粉样变的早期诊断，也可用于化疗或自身外周血干细胞移植后是否复发的监测，如果化疗或移植效果好，则病患血清κ型游离轻链、λ型游离轻链以及κ/λ比值均在正常水平或相比治疗前有明显改善。

胶乳增强比浊方法可在全自动生化仪上测定λ型游离轻链，速度快、通量高。对于游离轻链的测定，国内目前主要使用英国Binding site公司的Freelite系列测定试剂，可以通过胶乳增强比浊方法测定Lambda游离轻链；但在临床应用中，Freelite系列的Lambda游离轻链测定试剂存在大量的非特异反应，造成很多结果与病人实际情况不符合，不仅不能给医生诊断带来参考，还容易误导医生判断，目前在国内医院推广应用很有限。

同时，发明人使用按照常规方式制备的Lambda游离轻链试剂，在未使用该特殊发明方法时也出现与Freelite试剂类似的非特异反应情况；由于不论是Freelite系列Lambda游离轻链测定试剂还是发明人自行制备的Lambda游离轻链试剂，均存在临床测定非特异反应严重的问题，因此，可以认为非特异反应严重是Lambda游离轻链比浊测定试剂盒制备中一大共同难点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于为了克服现有的Lambda游离轻链测定非特异反应的缺陷，提供了一种测定Lambda游离轻链浓度的试剂盒及方法。本发明的测定方法可以得到可靠的Lambda游离轻链测定结果。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

本发明提供了一种采用胶乳增强比浊方法测定Lambda游离轻链浓度的试剂盒，其包括反应缓冲液（R1试剂）和Lambda游离轻链抗体溶液（R2试剂），其特征在于，所述的Lambda游离轻链抗体溶液中吐温-20的浓度为11～16ml/L。

其中，所述的Lambda游离轻链抗体溶液中的Lambda游离轻链抗体较佳地为兔抗人多克隆Lambda游离轻链抗体，更佳地为Dako公司的兔抗人多克隆Lambda游离轻链抗体（即Dako公司的Polyclonal Rabbit Anti-Human Lambda Free Light Chains，货号为A0101）。

其中，所述的Lambda游离轻链抗体溶液的组成较佳地为Dako公司的兔抗人多克隆Lambda游离轻链抗体（货号为A0101）0.5mg/ml、胶乳微球3mg/ml、吐温-2011～16ml/L和防腐剂Proclin-3000.3ml/L。上述组成中，胶乳微球可购于国际知名胶乳供应商，如Bangslab公司或JSR公司。

其中，所述的反应缓冲液可为本领域Lambda游离轻链浓度测定方法中胶乳增强比浊方法常规使用的反应缓冲液，优选反应缓冲液的组成为4-羟乙基哌嗪乙磺酸（Hepes）100mmol/L、氯化钠150mmol/L、吐温-201ml/L和防腐剂Proclin-300 0.3ml/L。

本发明还提供了一种测定Lambda游离轻链浓度的方法，其包括下述步骤：采用胶乳增强比浊方法，将待测样品与上述反应缓冲液和Lambda游离轻链抗体溶液混合后，计算吸光度变化ΔA，与标准品的工作曲线比较即可得到待测样品的Lambda游离轻链浓度，其特征在于，所述的Lambda游离轻链抗体溶液中吐温-20的浓度为11～16ml/L。