[发明专利]一种阿托西班的纯化方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种多肽类药物的纯化方法，特别涉及一种催产素竞争性拮抗剂阿托西班的纯化方法。

背景技术：

阿托西班，英名为：Atosiban，为一种环状多肽，结构式如下：

化学式如下：

c[Mpa-D-Tyr(OEt)-Ile-Thr-Asn-Cys]-Pro-Orn-Gly-NH2，

阿托西班是子宫内及蜕膜、胎膜上受体的环状肽催产素竞争性拮抗剂，用于推迟不足月分娩。阿托西班可剂量相关性地抑制宫缩，并使环状肽催产素介导的前列腺素分泌减少，达到保胎的目的，在中国，年出生率为2000万，按目前临床统计数字，约5-15％的孕妇需要进行保胎治疗，按平均10％计，病人数量约为200万。

阿托西班的制备方法很多，如固相合成法是用氨基树脂与氨基酸羧基形成氨基酸的树脂复合物，然后依次将下一个氨基酸连接到前一个氨基酸上，制备成线性多肽，再通过环化，裂解，纯化得到阿托西班。有关阿托西班的纯化方法也很多，专利文献有：US20060148699A1，WO2006098707A，WO2011018745A1，CN102584953A，

现有技术中的纯化方法主要采用色谱柱分离纯化，如反相高效液相色谱法，HPLC色谱和离子交换色谱结合的方法等，中国专利(申请号：201210028890)公开了以三价铁离子盐作为还原剂对阿托西班粗肽溶液进行处理，除去其中的未氧化完全的杂质，之后利用高效液相色谱法纯化阿托西班粗肽溶液，然后利用反相高效液相色谱将纯化制得的阿托西班高氯酸盐转盐制得阿托西班纯品。

现有阿托西班的固相合成过程中，由于合成步骤较多，加入的原料数量较多，造成产物杂质种类比较多，已知的杂质包括：[Gly⁹-OH]-阿托西班、[Asp⁵-OH]-阿托西班、[D-Asn⁵]-阿托西班等，未知杂质还有很多。有关杂质中[Gly⁹-OH]-阿托西班，结构如下：

该杂质为毒性最大的杂质之一，而且极其不稳定，易变色，该杂质的存在严重影响阿托西班的色泽，含量以及使用安全。因此需要找到有效的方法将其去除并使其达到优质标准级别0.1%以下。本发明人研究发现，该杂质用现有技术的手段很难除去，有些方法虽可以去除部分，但去除效果不理想，难以达到优质标准级别同时容易造成阿托西班本身收率降低。为此，本发明人重点研究如何去除杂质[Gly⁹-OH]-阿托西班而不影响阿托西班的收率问题。

本发明人用现有的纯化方法，对用固相合成法制备的阿托西班进行了纯化，发现杂质[Gly⁹-OH]-阿托西班的含量均无法达到预订目标0.1%。为此，本发明人对阿托西班的纯化方法进行了研究，从而得到了本发明的技术方案。

发明内容：

本发明的目的是提供一种高收率、高纯度以及低杂质的阿托西班的纯化方法。本发明需要解决的技术问题是：选择一种阿托西班的纯化方法，解决(1)阿托西班成品纯度不高，(2)阿托西班成品收率不高，(3)阿托西班与杂质[Gly⁹-OH]-阿托西班不能有效分离的问题。

本发明中一些常用的缩写及术语具有以下含义；

Fmoc：芴甲氧羰基

Fmoc-AA：芴甲氧羰基保护的氨基酸

tBu：叔丁基

HoBt：1-羟基苯骈三唑

DIC：N，N′-二异丙基碳化二亚胺

MPa：巯基丙酸

D-Tyr(Et)：D-型的酪氨酸链用乙基保护

Ile：异亮氨酸

Thr：苏氨酸

Asn：天门冬酰胺

Cys：半胱氨酸

Pro：脯氨酸

Orn：鸟氨酸

Gly：甘氨酸

Trt：三苯甲基

Et：乙基

Boc：叔丁氧羰基

DMF：N，N′-二甲基甲酰胺

Piperidine：六氢吡啶

Fmoc-Rink Amide Am resin：用Fmoc保护的Rink氨甲基树脂

TFA：三氟醋酸

TIS：三异丙基硅烷

MeOH：甲醇

DCM：二氯甲烷

PEG8000：聚乙二醇8000

Tris–HCl：三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐

HEPES：4-羟乙基哌嗪乙磺酸