[发明专利]灰树花275菌株粗多糖在抗禽流感H5N1病毒上的应用

权利要求书

1.灰树花275菌株粗多糖在制备抗禽流感H5N1病毒药物上的应用，其特征是，所述灰树花275菌株粗多糖由下述方法制得：

(1)加热提取：取灰树花275菌株液体发酵的发酵全液或菌丝体或澄清液，或者固体发酵的菌丝体放于容器内，加入纯净水调整其pH值为8～12，置60～120℃下加热100～240分钟；

 (2)过滤：之后冷却、以180～200目的筛网过滤灰树花菌丝体，收集滤液，滤渣以其4～8倍体积的蒸馏水稀释，重复上述操作1～2遍，再收集滤液；

(3)减压浓缩：合并收集的滤液，在温度50～70℃，压力0.2～0.6Kg/cm²，真空度为0.02～0.06Mpa的条件下进行减压浓缩，使滤液浓缩至原有体积的1/10～1/20；

(4)除色素：取浓缩后的提取液，用氨水调pH至6.0～8.0，于30～45℃下搅拌，按每10ml滴加1ml～2ml 10 %～30%的H₂O₂，进行脱色10～24h，得到淡黄色液体； 

(5)除小分子化合物：然后利用透析袋，截留分子量3000～5000以上，4℃～10℃条件下透析24h～48h，去除多余的H₂O₂、小分子化合物；

(6)除脂肪：取上述提取液，装入索氏提取器,按1：0.5～1的比例加入石油醚，加热回流提取2～6h,待冷却后，弃去石油醚层，回收余下的提取液；

(7)醇析：在回收的提取液中，加入量为其体积4～8倍的95%醇溶液并不断搅拌，搅拌速度为30～60r/min，10～20分钟后，静置24～48小时进行醇析；

(8)离心分离：醇析后弃上清液，沉淀物移入离心管中，以转速为3000～5000r/min离心20～30min，离心后弃去上清液，收集离心沉淀物；

(9)收集物干燥：将上述收集的离心沉淀物，在50～70℃温度条件下干燥36～48小时； 

(10)收集物粉碎：取上述烘干的收集物，进行粉碎，经200目筛网过筛后即为灰树花粗多糖；

其中，所述的灰树花275菌株发酵全液是指灰树花275菌株发酵液与菌丝体的集合体。

2.如权利要求1所述的灰树花275菌株粗多糖在制备抗禽流感H5N1病毒药物上的应用，其特征在于所述灰树花发酵全液经分离获得灰树花275菌株菌丝体。

3.如权利要求1或2所述的灰树花275菌株粗多糖在制备抗禽流感H5N1病毒药物上的应用，其特征在于，所述灰树花275菌株粗多糖通过以下步骤获得：

（1）液体种子培养：采用500毫升三角瓶，每瓶装200毫升液体培养基，将10%的灰树花菌种以常规方法接种到装有液体培养基的三角烧瓶内，调节pH为3-8，培养温度为20-35℃，摇瓶转速为80-280r/min，培养7-15天，即可得到灰树花液体种子；

（2）发酵罐发酵：先将发酵罐中的培养基进行灭菌，灭菌压力为0.1～0.2公斤/平方厘米，灭菌时间为1-2小时；当灰树花液体种子pH值降至2.5-4时，将摇瓶中的灰树花251菌株种子接种到50L发酵罐的培养基中，调整pH为5-8，培养温度25-35℃，通气量0.5-1.1vvm，搅拌转速100-250r/min，培养7-30天，即可获得灰树花275菌株发酵全液。

4.如权利要求3所述的灰树花275菌株粗多糖在制备抗禽流感H5N1病毒药物上的应用，其特征在于，灰树花275菌株发酵培养基以克/100毫升计是：地瓜淀粉     1～3% ，葡萄糖1～5%，蛋白胨0.2～0.6%，酵母膏0.2～0.5%，硫酸镁  0.1～0.3%， 磷酸二氢钾 0.05～0.1%。