[发明专利]导入SV40T基因构建神经管缺陷细胞模型及其细胞库

说明书

技术领域

本发明涉及导入SV40T基因(猴肾病毒40大T抗原基因或SV40LT抗原基因)构建神经管缺陷细胞模型及其细胞库，主要用于新生儿出生缺陷干预研究领域，为神经管缺陷的研究提供细胞模型并保存其科研资源。

背景技术

神经管缺陷又名神经管畸形，是一种常见而严重的先天缺陷。神经管是胎儿的中枢神经系统，在胚胎的第15-17日开始，神经系统开始发育，至胚胎22日左右，神经褶的两侧开始互相靠拢，形成1个管道，称为神经管，它的前端称为神经管前孔，尾端称为神经管后孔，胚胎在24-25日及26日时，前孔及后孔相继关闭。胎儿神经管畸形主要表现为无脑儿、脑膨出、脑脊髓膜膨出、隐性脊柱裂、唇裂及腭裂、开放性脊柱裂、闭合性脊柱裂等。我国每年出生的2300万新生儿中，有近40万患有各种先天性疾病，其中神经管畸形的发生率为0.2％-0.4％。

有研究表明，人类大脑是在神经管上发育而形成的，如在妊娠3-4周起至4个月，孕妇缺乏叶酸，便可能导致胎儿出现不同程度的神经系统先天性畸形。许多种类基因的表达或突变与神经系统发育、神经管畸形有关，这些基因是转录因子，包括①发育调节基因及转录因子类基因。②原癌基因和抑癌基因。③生长因子及其受体基因。④蛋白激酶C相关基因。⑤同型半胱氨酸代谢相关基因。⑥其他基因：细胞骨架类、细胞连接类基因等。神经管畸形发生的重要因素是妊娠期间孕妇体内缺乏叶酸，因此孕妇在孕前1个月至孕后4个月内，每日口服1次叶酸0.4毫克，就可使胎儿神经管畸形发生率降低70％。尽管如此，神经管畸形的发病机制、如何更好地预防、干预或治疗，还有待于更进一步的研究。

但是，由于没有可在体外长期培养的、可用于神经管畸形发病机制研究的永生细胞模型及其细胞库，就难以从细胞水平在体外研究神经管缺陷细胞受物理、化学、生物、遗传等影响的基因突变、基因表达、功能改变、生理特性、生物传导等机制，从而较严重地限制了神经管缺陷的进一步研究。

国外文献报道，猴肾病毒40(SV40)可以使某些人类细胞发生永生化。Poulin DL、Kung AL和Sullivan CS等研究表明，SV40T抗原基因的导入能加快转化细胞的生长速率，永生化细胞在体外多次传代后，仍具有相对稳定的增殖特性和功能状态，同时也能保留其原始细胞的许多分化表型，可以用于转基因动物模型及人类和动物某些种类的细胞模型的建立，据此可以借助于研究转基因永生化细胞及动物模型而在体外研究原始细胞的特性，从而研究其发病机制。

根据文献报道，Reilly用猿猴病毒(SV40)大T抗原基因转化来建立血管平滑肌细胞株，构建细胞模型以研究肝素对血管平滑肌的抑制作用机制。Su等利用经SV40转化的角化上皮细胞株，构建细胞模型来分析上皮细胞内蛋白质合成的调控作用。Miquel等用SV40转化的角化上皮细胞株，作为细胞模型研究层粘连蛋白5介导的细胞粘附作用。Webber等用经SV40转化的前列腺上皮细胞株作为细胞模型来研究前列腺上皮细胞的生理功能和分泌功能。Racusen等用经Ad12-SV40转化肾小管上皮细胞模型来研究近曲小管的损伤和疾病。Hougton等用SV40转化建立骨髓基质细胞株作为细胞模型以研究在一定培养条件下，细胞具有向脂肪细胞和成骨细胞的双向分化的潜能，进一步研究骨质疏松的机制。

因研究工作的需要，几乎每种疾病都建立了各自的细胞模型。如糖尿病细胞模型、癌细胞细胞模型、转基因细胞模型、绝经期综合症细胞模型、子宫内膜细胞模型、癫痫细胞模型、电子细胞模型、酒精性痴呆细胞模型、脑水肿细胞模型。等等。

但是，至今尚未见有关构建可用于在体外从细胞水平研究神经管缺陷发病机制的永生细胞模型及其细胞库的文献报道，也无法开展相关的研究项目。为了解决上述问题，本发明人提出了本发明。

发明内容

本发明的目的是要提供以SV40LT抗原基因介导(导入)神经管缺陷细胞模型及其细胞库的构建方法，另一目的是为在体外从细胞水平研究神经管缺陷的发病机制提供SV40LT抗原基因介导神经管缺陷细胞模型及其细胞库。