[发明专利]动物器官人源化的方法及人-动物嵌合体模型

权利要求书

1.一种动物器官人源化的方法，其特征在于，包括如下步骤：

构建含有DTA基因的转基因动物以及含有Cre基因的转基因动物，其中，所述含有DTA基因的转基因动物的启动子与DTA基因被两个LoxP和一个停止序列隔开，由所述LoxP加上所述停止序列抑制表达，所述含有Cre基因的转基因动物的Cre基因的启动子由转入动物体内特异性启动子启动的四环素依赖的反式作用子启动；

将所述含有DTA基因的转基因动物与所述含有Cre基因的转基因动物杂交，并对杂交后代进行基因筛选得到含有Cre基因及DTA基因的双转基因动物；

向所述含有Cre基因及DTA基因的双转基因动物体内植入人体干细胞，制得含有人体细胞的双转基因动物；

对含有人体细胞的双转基因动物喂食或注射四环素或四环素衍生物，诱导表达Cre，从而介导两个Loxp位点的重组，移除所述停止序列，DTA基因的启动子接近并启动表达DTA基因，杀死动物体内目标细胞，促进人源性细胞的增生，得到人-动物嵌合体模型。

2.如权利要求1所述的动物器官人源化的方法，其特征在于，所述含有DTA基因的转基因动物为由ROSA26启动子启动表达的含有LoxP停止序列及DTA基因的动物，所述LoxP停止序列位于所述ROSA26启动子与所述DTA基因之间。

3.如权利要求2所述的动物器官人源化的方法，其特征在于，所述含有DTA基因的转基因动物在所述ROSA26启动子之后依次含有如下序列：SA剪接受体序列、LoxP停止序列、eGFP序列盒、pFK-Neo序列盒、3个SV40poly A序列、LoxP停止序列及DTA基因序列。

4.如权利要求1所述的动物器官人源化的方法，其特征在于，所述动物体内特异性启动子为动物肝脏特异性启动子白蛋白 基因启动子，所述人体干细胞为人肝脏干细胞。

5.如权利要求4所述的动物器官人源化的方法，其特征在于，所述含有Cre基因的转基因动物是一种TetOn调控系统，其中TetOn调控系统所表达的反向四环素依赖的反式作用子由所述启动子Alb启动表达，所述Cre重组酶序列位于由所述反向四环素依赖的反式作用子启动的hCMV启动子之后且可由所述hCMV启动子启动表达。

6.如权利要求1所述的动物器官人源化的方法，其特征在于，所述动物体内特异性启动子为动物造血干细胞特异性基因启动子，所述人体干细胞为人造血干细胞。

7.如权利要求1-6中任一项所述的动物器官人源化的方法，其特征在于，所述动物为小鼠、猪或山羊。