[发明专利]一种提高紫锥菊外植体再生不定芽的再生培养基及培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物生物技术领域，具体地，涉及一种提高紫锥菊外植体再生不定芽的再生培养基及培养方法。

背景技术

紫锥菊(Echinacea purpurea L.)为菊科多年生草本植物，具有良好的免疫调节作用，其提取物是近年来在国际上受到普遍重视的一种免疫促进剂和免疫调节剂。由于其确切的功效作用，紫锥菊已经成为一种世界著名的药用植物。人们为了获得多种品种的紫锥菊，已经尝试将多种生物技术手段应用于其上，如转基因、花药培养、染色体加倍。这些目的的达成，都必须经过一个共同的步骤，即诱导培养物，产生不定芽。虽然现有技术中已有很多研究针对紫锥菊不定芽再生而展开，但其再生效率并不理想。

现有技术中，在紫锥菊外植体诱导不定芽再生时，通常采用是含有15～60 g/L蔗糖，0.1～1.5 mg/L BA及0～0.15 mg/L NAA，以3～9 g/L琼脂固化的MS培养基，在这种再生培养基的培养条件下，不同基因型紫锥菊外植体的不定芽再生效率差异很大，除了部分基因型能够获得较合适再生效率外，其余大量基因型的再生效率很低，芽体的质量也较差，严重制约了紫锥菊转基因、花药培养、染色体加倍等植物生物技术研究的开展，限制了紫锥菊生物技术育种工作的进行。

己酸二乙氨基乙醇酯（DA-6）是一种植物生长调节剂，通常用于田间栽培，很少用于组织培养。而且还没有人尝试将其用于紫锥菊组织栽培方面。

发明内容

本发明为了克服现有技术中紫锥菊外植体再生不定芽时再生率低、再生芽体质量差的缺陷，提供一种提高紫锥菊外植体再生不定芽的再生培养基。

本发明的另一个目的是提供一种提高紫锥菊外植体再生不定芽的方法。

本发明通过以下技术方案予以实现上述目的：

一种提高紫锥菊外植体再生不定芽的再生培养基，其特征在于，紫锥菊外植体所需的再生培养基是在MS培养基的中除了添加15～60 g/L蔗糖、3～9 g/L琼脂、0.1～1.5 mg/L BA和0.01～0.15 mg/L的 NAA之外，还特别地添加了己酸二乙氨基乙醇酯（DA-6）。

    所述紫锥菊外植体根据倍性和来源的不同分为二倍体、三倍体、四倍体或六倍体紫锥菊叶片、叶柄或根外植体。

    二倍体或三倍体紫锥菊叶片外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.01～0.32 mg/L；四倍体或六倍体紫锥菊叶片外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.01～0.16 mg/L；

二倍体或三倍体紫锥菊叶柄外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.01～0.16 mg/L；四倍体紫锥菊叶柄外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.01 mg/L；六倍体紫锥菊叶柄外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.08～0.16 mg/L；

二倍体或三倍体紫锥菊根外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.01 mg/L；四倍体紫锥菊根外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.01～0.16 mg/L。

优选的，所述二倍体或三倍体紫锥菊叶片外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.08～0.16 mg/L；更优选地，所述二倍体或三倍体紫锥菊叶片外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.16 mg/L。所述四倍体或六倍体紫锥菊叶片外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.08～0.16 mg/L，更优选地，四倍体或六倍体紫锥菊叶片外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.08 mg/L。

优选的，所述二倍体或三倍体紫锥菊叶柄外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.01～0.08 mg/L；更优选地，所述二倍体紫锥菊叶柄外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.08 mg/L；所述三倍体紫锥菊叶柄外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.01 mg/L。优选地，所述六倍体紫锥菊叶柄外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.16 mg/L。    

优选地，所述四倍体紫锥菊根外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.01～0.08mg/L；更优选地，所述四倍体紫锥菊根外植体所需的再生培养基中添加的DA-6的量为0.01 mg/L。