[发明专利]卵黏蛋白液体制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高抗微生物活性的卵黏蛋白制剂及其制备方法。

背景技术

病原微生物的表面抗原性会经常不断的发生变异，使得选育病毒疫苗株的过程费时费力，更重要的是疫苗的接种效果会因为病毒表面抗原的变异或漂移而降低。抗病毒化学药物及抗生素是当前治疗传染病的最主要途径，而这些药物对机体均有一定的毒副作用，并且一些流感病毒及病原菌已经对部分药物产生了耐药性。基于这种形势，在研制高效疫苗和药物的同时，从丰富的自然资源中寻找和挖掘新的天然抗病毒活性成分已成为令人瞩目的新领域。

在天然抗病毒活性成分中，抗病毒蛋白是重要的一类。目前已经从植物、昆虫和海洋生物等物种中提取出多种抗病毒蛋白，而对我国乃至世界上产量丰富的蛋白资源——禽蛋中的抗微生物蛋白研究却相对较少。实际上，禽蛋中存在多种抗微生物感染的活性蛋白质，如卵黏蛋白、转铁蛋白、抗生物素蛋白以及溶菌酶等，其中的卵黏蛋白是非常重要的抗菌抗病毒蛋白质之一。同很多粘蛋白家族成员一样，卵黏蛋白是一种含有唾液酸残基的巨大分子量的硫酸酯糖蛋白，现有的研究已经发现卵黏蛋白具有较好的抗菌抗病毒活性，其对多种病毒引起的血球凝集反应具有很好的抑制作用。然而到目前为止，尚未有卵黏蛋白产品能够达到商业应用的水平，其中两个很重要的原因是卵黏蛋白经过纯化制备过程后会造成抗菌抗病毒活性的损失，另外其较低的溶解性无法达到其发挥活性需要的浓度。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种具有抗菌和抗病毒活性的卵黏蛋白液体制剂。

上述目的可以通过以下技术方案实现：

一种卵黏蛋白液体制剂，它含有下述重量百分比的成分：

所述辅助蛋白为溶菌酶和/或卵转铁蛋白。

优选地，所述卵黏蛋白液体制剂中还含有50～500mmol/L的钙离子或10～500mmol/L镁离子。

进一步优选地，所述卵黏蛋白液体制剂中含有50～200mmol/L的钙离子或镁离子。

优选地，所述辅助蛋白为溶菌酶和卵转铁蛋白，所述溶菌酶与卵转铁蛋白的重量比为1∶1。

优选地，所述氨基酸为赖氨酸和/或精氨酸。

优选地，所述多元醇为甘露醇和/或聚乙二醇。

一种卵黏蛋白液体制剂的制备方法，包括以下步骤：

1）将氨基酸溶解于pH值为6～8的缓冲液或水中，得到重量含量为1.5～4%的氨基酸溶液，再向氨基酸溶液中加入卵黏蛋白，使卵黏蛋白的重量含量为0.01～0.1%，搅拌至卵黏蛋白完全溶解；

2）继续向步骤1）的溶液中加入辅助蛋白，使辅助蛋白的重量含量为0.001～0.01%，4℃下用50～100转/分钟的转速搅拌，使其充分溶解；

3）最后加入多元醇，使多元醇的重量含量为0.5～5%，经0.45μm的无菌微滤膜过滤，即得，

所述辅助蛋白为溶菌酶和/或卵转铁蛋白。

优选地，还包括在步骤2）或3）中加入钙离子或镁离子，并使钙离子的浓度达到50～500mmol/L或镁离子的浓度达到10～500mmol/L的步骤。

优选地，所述氨基酸为赖氨酸和/或精氨酸。

优选地，所述多元醇为甘露醇和/或聚乙二醇。

本发明制得的卵黏蛋白液体制剂可以喷涂于食品表面、动物或人口鼻、创伤伤口等处，可以起到抵御微生物入侵、降低病毒活性与毒力的作用。

本发明制备的卵黏蛋白液体制剂对细菌具有很好的粘附性，对病毒具有很强的抵抗活性，制剂中卵黏蛋白浓度高，蛋白生物活性有效期长，能有效抵御微生物入侵、降低病毒活性与毒力，对H5N1和H1N1流感病毒具有一定的抑制作用。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述。

实施例1 辅助蛋白对卵黏蛋白细菌粘附效果的影响

研究表明卵黏蛋白可通过黏附作用限制微生物的活动，进而对微生物的生长、增殖及毒性等起到抑制作用。在禽蛋蛋清中，天然状态下卵黏蛋白与溶菌酶等其他蛋清蛋白质以聚合态的形式形成浓厚蛋白，为禽蛋提供了抵御微生物入侵的屏障。因此，本发明模拟天然状态，研究不同的辅助蛋白对卵黏蛋白细菌粘附能力的影响。

在高纯度卵黏蛋白中分别按照表1的比例加入不同种类和比例的辅助蛋白，制成蛋白的混合物，然后以大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌为对象，应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定不同蛋白混合物对细菌的粘附效果。