[发明专利]一种高效液相色谱检测血液中丙戊酸钠含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医疗技术领域，特别涉及一种高效液相色谱检测血液中丙戊酸钠含量的方法。

背景技术

丙戊酸钠是临床常用的广谱抗癫痫、治疗情感性精神障碍的药物，尤其对单纯失神发作、全身性强直、陈挛发作、肌陈挛发作疗效显著，对单纯部分性发作、复杂部分性发作具有显著疗效，有效血药浓度范围为50-100μg/ml。但丙戊酸钠体内过程和疗效个体差异大，剂量与血药浓度的相关性不稳定，且血药浓度过高易引起恶心、呕吐及肝功能损害等不良反应，因而通过检测血药浓度来调整剂量，是确保疗效和用药安全的必要手段。

目前，测定体内丙戊酸钠血药浓度最常用的方法为荧光偏振免疫法，需要采用专用的试剂盒，价格昂贵，也不能分离和排除丙戊酸钠代谢产物和内源性杂质的干扰，造成测量精度低的问题。

因此，生物医疗技术领域急需一种杂峰少、灵敏度高、精确度高、成本低廉、能够绘制出丙戊酸钠标准曲线的高效液相色谱检测血液中丙戊酸钠含量的方法。

发明内容

为了克服现有技术测定丙戊酸钠血药浓度价格贵、精度低的缺陷，本发明提供一种高效液相色谱检测血液中丙戊酸钠含量的方法，技术方案如下：

一种高效液相色谱检测血液中丙戊酸钠含量的方法，其特征在于，包含以下步骤：

第一步，配制37.6μg/ml的的丙戊酸钠标准溶液；

首先，称取分析纯丙戊酸钠37.6mg，放入50mL容量瓶中，然后将0.2mol/l的分析纯氨水倒入装有丙戊酸钠的容量瓶中，稀释至50ml刻度为止，摇匀；

第二步，稀释丙戊酸钠标准溶液，制成丙戊酸钠工作液；

从第一步中的50ml丙戊酸钠标准溶液容量瓶中，分别取出200μl装入8个容量瓶中，向这8个容量瓶中倒入0.2mol/l的分析纯氨水，将丙戊酸钠标准溶液分别稀释成浓度为18.80、37.60、56.40、75.20、94.00、112.80、127.84、150.40μg/ml的丙戊酸钠工作液备用；

第三步，配制50.2μg/ml的的环己烷羧酸内标溶液；

首先，称取分析纯环己烷羧酸37.6mg，放入50mL容量瓶中，然后将0.2mol/l的分析纯氨水倒入装有环己烷羧酸的容量瓶中，稀释至50ml刻度为止，摇匀；

第四步，配制5.016mg/ml衍生化试剂，并放置于冰箱中贮存；

首先，称取分析纯w-溴苯乙酮125.4mg，放入25mL容量瓶中，然后将色谱纯乙腈倒入装有w-溴苯乙酮的容量瓶中，稀释至25ml刻度为止，摇匀，放置于冰箱中贮存；

第五步，配制1000ml流动相；

首先将750ml分析纯甲醇倒入1000ml的容量瓶中，然后向装有甲醇的容量瓶中倒入250ml去离子水，摇匀；

第六步，取200μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，作为空白标样；

第七步，取200μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取30μl环己烷羧酸内标溶液，倒入装有正常人血清的具塞抽提管中，作为标样1；

第八步，取200μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取200μl丙戊酸钠标准溶液，倒入装有正常人血清的具塞抽提管中，作为标样2；

第九步，取200μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取30μl环己烷羧酸内标溶液和200μl丙戊酸钠标准溶液，依次倒入装有正常人血清的具塞抽提管中，作为标样3；

第十步，分别取200μl正常人的血清加入8支10ml具塞抽提管中，然后这8支具塞抽提管中分别加入30μl环己烷羧酸内标溶液和200μl的18.80、37.60、56.40、75.20、94.00、112.80、127.84、150.40μg/ml的丙戊酸钠工作液，作为标样4、5、6、7、8、9、10、11；

第十一步，取200μl病人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取30μl环己烷羧酸内标溶液，倒入装有病人血清的具塞抽提管中，作为标样12；

第十二步，首先分别向空白标样、标样1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12中加入200μl的1mol/l硫酸，摇匀后再分别加入4ml色谱纯正己烷，都漩涡混匀5分钟，静置5分钟后，分别进行3000r/min的离心运动10分钟；