[发明专利]人工诱导石斑鱼雌核发育鱼苗的方法

权利要求书

1.一种人工诱导石斑鱼雌核发育鱼苗的方法，该方法包括如下步骤：

(1)雄鱼的选择和精子的采集：

选择体格健壮体表无伤的鞍带石斑鱼雄性成鱼为亲本(5-7龄)，体重60-80kg／尾，置于海上网箱或陆地池塘进行培育，投喂冰鲜杂鱼和鱿鱼进行培育；待海水温度稳定在28-32℃时，根据斜带石斑鱼排卵规律，提前1-2日给鞍带石斑鱼雄鱼注射HCG(200U／kg)，20-28小时后将雄鱼置于封闭网箱中，采用麻醉剂将其麻醉后捞出水面置于帆布担架内挤精，采集的鞍带石斑鱼鲜精，使用精子稀释液按照1：8-10比例稀释，0-4℃冷藏保存；

(2)精子遗传物质灭活

取稀释过的鞍带石斑鱼精液平铺在预冷的培养皿中，精子液面厚度控制在0.1-0.15mm，置于紫外灯箱中照射，照射过程中遮蔽自然光并置于摇床中进行，保持不停的摇动以确保精子照射均匀，紫外光照射剂量为40-60mJ／cm²；

(3)人工授精的方法

鞍带石斑鱼紫外照射处理完成后，收集精子置于冰上避光保存；将待产斜带石斑鱼雌鱼捞出，擦干体表水分，将成熟卵子挤入干燥刻度烧杯中；按照毫升处理精子授精40-60毫升卵子的比例进行精卵人工混合，混合45-90秒后加入洁净自然海水完成人工授精；

(4)冷休克诱导石斑鱼卵子

提前准备预冷的海水及冰箱，人工授精后4-8分钟，用小手操网将卵子捞出，按照每50ml卵子使用2000-4000ml预冷的2-6℃海水的比例立即转入预冷的海水中，低温休克处理时间为15-25分钟，经孵化桶孵化得人工培育石斑鱼育苗。

2.根据权利要求1所述的方法，所述的精子稀释液配方为：蔗糖110mM，KHCO₃ 100mM，胎牛血清10％，Tris酸10mM。

3.根据权利要求1所述的方法，所述的麻醉剂是丁香酚。