[发明专利]一种疫苗组合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包括免疫量的含有兔瘟病毒VP60蛋白核酸序列的表达载体的沙门氏菌。

2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述兔瘟病毒VP60蛋白的蛋白序列为SEQ ID NO.2；优选地，所述兔瘟病毒VP60蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

3.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述表达载体为原核表达载体；更优选地，所述载体携带asd基因，可编码天冬氨酸-β-半醛脱氢酶；进一步优选地，所述载体为pYA3341、pYA3342、pYA248、pYA262中的一种或几种或其改进型。

4.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述沙门氏菌为减毒鼠伤寒沙门氏菌；优选地，所述沙门氏菌为asd基因缺陷型菌株；进一步优选，所述沙门氏菌为asd基因缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550。

5.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物进一步包括冻干保护剂，所述冻干保护剂为脱脂奶粉、蔗糖、明胶、海藻糖中的一种或几种。

6.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物中沙门氏菌含量为≥1×10⁹cfu/头份；优选地，所述沙门氏菌含量为≥1×10¹⁰cfu/头份。

7.一种疫苗组合物的制备方法，所述方法包括：

（1）反转录兔瘟病毒VP60基因，将其连接到克隆载体扩增，然后连接到表达载体，获得重组表达质粒；

（2）将所述重组表达质粒转入第一中间宿主菌扩增，然后转入第二中间宿主菌进行甲基化修饰，获得经甲基化修饰的重组质粒；

（3）将所述重组质粒转入终宿主菌，诱导表达，获得兔瘟疫苗组合物。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述步骤（1）中克隆载体为pGEM-T、pMD18-T、pMD19-T、PUC18的一种或几种；所述的表达载体为携带asd基因、可编码天冬氨酸-β-半醛脱氢酶的原核表达载体。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述步骤（2）中所述的第一中间宿主菌为X6212，所述的第二中间宿主菌为减毒鼠伤寒沙门氏菌X3730；所述步骤（3）中所述的终宿主菌为减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550，更优选为所述的减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550为asd基因缺陷型菌株。

10.权利要求1～6任一项所述的疫苗组合物在制备预防和/或治疗兔瘟病毒性传染病的药物中的应用。