[发明专利]天麻素与钩藤碱配伍对血管内皮细胞的保护及作用机制

说明书

技术领域

本发明属于细胞生物学技术领域，涉及天麻、钩藤两种天然降压药物有效成分：天麻素与钩藤碱的配伍，特别涉及两种成分配伍对人静脉内皮细胞的保护及作用机制。

背景技术

天麻是中国传统名贵中药，临床常用于头痛眩晕、肢体麻木、小儿惊风、癫痫、抽搐、破伤风等症。天麻中含有多种化学成分，如天麻素、天麻醚苷、天麻多糖、香荚兰醇、香荚兰醛、对羟基苯甲醇，柠檬酸、琥珀酸等。

天麻素是至今可以分离得到的含量最多的单一成分，结构为对-羟甲基苯-β-D-葡萄吡喃糖苷。目前，天麻素在临床上多应用于头痛眩晕及高血压等心脑血管疾病的辅助治疗，效果显著。其降血压主要通过对抗儿茶酚胺的缩血管效应；降低外周血管阻力、血压和增加动脉血管顺应性；增加心脑血管血流量；抑制炎症早期的渗出和阻止血栓形成和调节内皮舒张/收缩因子的分泌对心脑血管及神经细胞保护发挥作用。

在大鼠离体主动脉预收缩实验中，天麻素显示出一定的血管舒张作用。舒张效果随浓度的增加呈现增强趋势，当天麻素浓度为1.00g/L时血管舒张率达到最大值64％。进一步的研究表明，天麻素的降压作用可能是通过改善血管内皮功能来实现的

钩藤，原名钓藤。具有清热平肝；熄风止痉之功效。主治小儿惊风；夜啼；热盛动风；子痫；肝阳眩晕；肝火头胀痛。中医理论认为，钩藤具有预防和治疗心血管疾病的药理作用，包括抗血栓，抗心律失常和降血压。研究表明，钩藤茎枝含有多种吲哚类生物碱，包括钩藤碱、异钩藤碱、柯诺辛碱、异柯诺辛碱、柯楠因碱等多种化合物。

钩藤碱和异钩藤碱为钩藤的主要有效活性成分，钩藤碱、异钩藤碱及钩藤总碱均有明显的降血压作用。大鼠麻醉后经颈总动脉插管记录外周血压，静脉注射钩藤提取物：异钩藤碱、钩藤碱、钩藤总碱及非生物碱部分，实验表明钩藤中4种成分的降压强度为异钩藤碱(42.0％)＞钩藤碱(32.1％)＞钩藤总碱(21.3％)＞非生物碱(12.4％)。提示钩藤中主要降压成分为异钩藤碱和钩藤碱。

中药复方强调整体上调节机体，治疗效果更好，因此便需要以配伍中药入药，配伍的各个药物之间能相互协同或拮抗，其治疗作用远非单味中药能比。最具代表性的是我国中医药中用于治疗高血压的主要方剂——天麻钩藤饮。钩藤味甘性凉入肝、心经清热平肝、熄风定惊擅治肝热风动之证；天麻甘平柔润，入肝经养液平肝、息风潜阳为治风之圣药，多用于虚风内动、风痰上扰所致诸证。二药合用，共奏清热平肝、息风止痉之功效。

临床研究发现，天麻钩藤饮对高血压有很好的疗效。用天麻钩藤的混合液进行降血压研究，发现混合液的降血压效果比单味天麻、钩藤提取液显著。但是长期以来，中药复方成分复杂，作用机制不明确等问题一直困扰传统中药的发展。

天麻素和钩藤碱提取自天麻和钩藤两味君药主要成分，成分明确，质量可控，创新之处在于提取了复方中发挥君药作用的单体，再将这些单体进行组合。不同于传统复方，这种组合将使治疗作用更加集中，动物实验结果也证实了这一点。以大鼠胸主动脉为对象，考察血管的舒张效果。与每一种单体相比，钩藤碱、天麻素2种单体组合配伍时，对预收缩血管的舒张作用均有不同程度的增强，并且最大舒张效果都高于复方。在此基础上深入研究单体配伍成分对内皮细胞的保护作用，有利于阐明天麻素与钩藤碱配伍降血压作用机制，为中药二次开发提供新思路。

同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)是一种含巯基的氨基酸，是甲硫氨酸(methionine，Met)和半胱氨酸(cysteine，Cys)代谢过程中的一个重要中间产物。研究发现血中HCY浓度升高可损伤血管内皮细胞，并能诱导或抑制内皮细胞中多种基因的表达。高同型半胱氨酸血症通过氧化应激机制诱发心血管疾病，HCY在氧化反应中，可产生超氧化物阴离子、过氧化氢及羟基等活性氧物质(reactive oxygen species，ROS)，其可与NO反应加速NO失活，降低NO生物利用度；HCY本身也能与NO反应，直接导致NO浓度降低，使内皮细胞明显受损伤；HCY还能使低密度脂蛋白自身氧化，生成氧化修饰低密度脂蛋白(oxidized low density lipo-protein，OX-LDL)，而后者可被巨噬细胞摄取并转变为泡沫细胞导致血管内皮细胞功能的进一步损伤，同时可影响一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)的表达进一步使NO合成减少。因此应用HCY可以模拟高血压病理条件下细胞损伤模型。