[发明专利]一种巨大芽孢杆菌及其固体发酵制备菌剂的方法和应用

权利要求书

1.一种巨大芽孢杆菌，其分类命名为巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）JSSW-JD-2F5，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO. 8045。

2.权利要求1所述巨大芽孢杆菌JSSW-JD-2F5固体发酵菌剂的制备方法，其特征在于步骤为：

（1）菌种活化：出发菌株为巨大芽孢杆菌JSSW-JD-2F5，无菌开启菌株JSSW-JD-2F5的冻干保藏菌种，划线接种于LB琼脂试管斜面，28～37℃培养36～48h，然后划线转接于LB琼脂茄子瓶斜面，28～37℃培养36～48h；镜检，当90%以上菌体形成芽孢时，即为成熟；

（2）种子菌悬液的制备：将成熟的种子用无菌水从斜面上刮洗下来，放入内装无菌玻璃珠的灭菌三角瓶，振荡分散菌泥，制成均匀的菌悬液，备用；

（3）固体发酵培养：

固体发酵培养基组成：按质量百分比计，食用菌菌糠5.0%～10.0%，麸皮15.0%～30.0%，豆粕1.0%～4.0%，CaO 0.05%～1.0%，自来水调节补足至100%；

将固体发酵培养基以发酵瓶容积计w/v 10%～20%的装量装入发酵瓶中，并用八层纱布封口，121℃灭菌30min；将步骤（2）制备的菌悬液在80℃水浴中加热10 min，以固体发酵培养基质量计v/w 1.0%～10.0%的接种量接入发酵瓶内灭菌的固体发酵培养基中，发酵瓶置于恒温培养箱，28～37℃培养，每隔12h拍打发酵瓶壁，使瓶中物料疏散、混匀，发酵培养36～48h，取样镜检，当90%以上菌体形成芽孢时，即发酵结束；

（4）巨大芽孢杆菌固体发酵菌剂的制备：将步骤（3）所得含巨大芽孢杆菌活菌的发酵产物在40～50℃下烘干，粉碎机粉碎，过40目筛，即制得巨大芽孢杆菌固体发酵菌剂成品，以系列稀释法进行平板计数，芽孢浓度不低于1.0×10¹⁰CFU/g。

3.用权利要求2所述方法制备的巨大芽孢杆菌固体发酵菌剂的应用，其特征在于用作畜禽渔业养殖饲料的添加剂，将巨大芽孢杆菌固体发酵菌剂按质量百分比0.01%～0.05%的比例添加入饲料中。