[发明专利]一种含人Rad51C启动子的载体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种载体及其应用，尤其是涉及一种含人Rad51C启动子的载体及其应用。

背景技术

肿瘤治疗的目的在于能够选择性地杀伤或者清除恶性增殖细胞而不对正常细胞造成伤害。在2000年，有文献报道根据端粒酶hTER和hTERT在肿瘤细胞中具有活性而在正常细胞中没有活性的特点，利用hTER和hTERT的转录调节序列来调控外源毒性基因在膀胱癌细胞中的表达，从而选择性杀伤肿瘤细胞。随后Christopher等人利用重组酶蛋白Rad51在肿瘤细胞中的高表达的特点，也成功实现了在体内体外，转录水平上靶向抗肿瘤的治疗。

重组酶Rad51是大肠杆菌RecA的同源蛋白质，它通过介导DNA链配对以及链交换而参与DNA的同源重组修复。在人类中Rad51有5种家族成员XRCC2、XRCC3、Rad51B／Rad51L1、Rad51C／Rad51L2、Rad51D／Rad51L3，它们对于形成DNA损伤诱导的Rad51foci的组装是必须的。它们形成两个复合体，辅助Rad51进行DNA双链断裂中的同源重组修复，并且依赖于BRCA-1和BRCA-2途径辅助。这一同源同组修复过程还需要其他的蛋白Rad52，Rad54，Rad55，Rad57，RPA的帮助。因此这些蛋白质也有可能具有与Rad51相同的表达特异性，也存在潜在的靶向抗肿瘤的应用。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种含人Rad51C启动子的载体及其应用。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种含人Rad51C启动子的载体，包括Rad51C启动子序列和编码具有肿瘤治疗作用的效应蛋白的核酸序列，所述的Rad51C启动子序列如SEQ ID No：1所示，与序列相同或者具有90％相似性的序列均为该专利的保护范围。

所述的编码具有肿瘤治疗作用的效应蛋白的核酸序列的转录过程由Rad51C启动子调控。

所述的Rad51C启动子序列为人类的Rad51C蛋白的启动子序列。

所述的具有肿瘤治疗作用的效应蛋白为有毒蛋白。

所述的有毒蛋白包括白喉毒素蛋白A链(DTA)、蓖麻毒蛋白、凋亡家族蛋白caspase3、caspase6、caspase7、caspase8。白喉毒素蛋白A链(DTA)是ADP-核糖转移酶，能够抑制真核生物蛋白合成，具有高毒性和广毒性，可以通过组织特异性表达杀伤肿瘤细胞；蓖麻毒蛋白(ricin)是蓖麻种子中的一种毒蛋白，它由分子量分别为32KD和34KD的A、B两条链组成，分别为效应链和连接链，是真核细胞核糖体失活蛋白，可以抑制多种肿瘤细胞的蛋白质合成，具有很强的细胞毒性；凋亡蛋白家族的成员caspase3、caspase6、caspase7、caspase8是能够引起细胞程序性死亡的蛋白酶。也可以应用于特异性杀伤肿瘤细胞。

作为优选，所述的有毒蛋白为白喉毒素蛋白A链。当有毒蛋白为白喉毒素蛋白A链时，该载体的序列如SEQ ID No：2所示。

一种含人Rad51C启动子的载体在治疗肿瘤药物中的应用。

通过肿瘤细胞中特异性高表达的Rad51C的启动子驱动有毒蛋白DTA在肿瘤细胞中的高表达而针对性地杀伤肿瘤细胞。DTA的开放式阅读框序列如SEQ IDNo：3所示。

与现有技术相比，本发明提供了一种含人Rad51C启动子的核酸序列，并提供了该核酸序列在治疗肿瘤药物中的应用。将Rad51C启动子和编码DTA的开放阅读框整合构成的质粒载体转染进入细胞，能够明显杀伤肿瘤细胞，而对正常细胞基本无影响。

附图说明

图1-1为Rad51、Rad51C、Rad51D和Rad52的mRNA在14株细胞中的表达水平分析结果；

图1-2为Rad51B、Rad51C、Rad51D和Rad52的mRNA在正常细胞系和肿瘤细胞系的表达水平统计学差异分析结果；

图2-1为Western blot结果图；

图2-2为Rad51C蛋白质和Actin蛋白质的表达条带进行量化，并用内参进行标准化分析结果；

图2-3为Rad51C在正常细胞系和肿瘤细胞系的表达水平Mann-whitney检验分析结果；

图3-1为pRad51C-EGFP质粒构建流程图；

图3-2为pRad51C-Luc质粒构建流程图；

图3-3为pRad51C-DTA质粒构建流程图；