[发明专利]与大白菜PHYB基因启动子等位变异类型phyB1/B2紧密连锁的分子标记及其应用有效
| 申请号： | 201310416483.9 | 申请日： | 2013-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN103497948A | 公开（公告）日： | 2014-01-08 |
| 发明（设计）人： | 刘栓桃;赵智中;张晓燕;张志刚;李巧云;王淑芬;卢金东;徐文玲;刘贤娴;付卫民 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院蔬菜研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 彭成 |
| 地址： | 250100 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大白菜 phyb 基因 启动子 等位 变异 类型 phyb1 b2 紧密 连锁 分子 标记 及其 | ||
1.一种与大白菜PHYB基因启动子等位变异类型phyB1/B2紧密连锁的分子标记，其特征在于：与phyB1检测相关的标记命名为ASM-phyB1，片段大小762bp，如SEQ ID No.1所示；与phyB2检测相关的标记命名为ASM-phyB2，片段大小317bp，如SEQ ID No.2所示。
2.一种用于鉴别权利要求1所述的分子标记的引物，其特征在于：序列如下：
正向引物PF：5'-CTCATCCATCCCTACGACCTT-3'；
反向引物PR1：5'-TGTGGATGGTTGTGAGTTAGGTAT-3'；
如SEQ ID NO.3、4所示。
3.权利要求1所述的分子标记在选择含有ASM-phyB1或ASM-phyB2的突变类型的大白菜种质材料或转育后代中的应用。
4.权利要求2所述的引物在选择含有ASM-phyB1或ASM-phyB2的突变类型的大白菜种质材料或转育后代中的应用。
5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：具体应用方式为：利用权利要求2的引物对待测个体的基因组DNA进行PCR扩增，检测扩增片段大小，如果扩增出762bp的条带，则为晚抽薹类型；扩出317bp的条带，则为早抽薹类型；如果同时扩出762bp和317bp的两条带，则为杂合型。
6.根据权利要求3或4或5所述的应用，其特征在于：所述PCR扩增具体为：在20μl反应体系中，包含1×TransStart FastPfubuffer；20ng的基因组DNA；0.4μM正反向引物；0.25mM dNTPmix;1个标准单位的TransStart FastPfu DNA聚合酶(TransGenAP221)；
PCR循环条件：95℃预变性5分钟;接着是95℃变性30秒，57.5℃退火30秒，72℃延伸1分钟，35-38个循环，最后72℃延伸10分钟。
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