[发明专利]兔源性纤维成分荧光定量PCR定性检测方法

说明书

本申请是申请号201210114158.2、申请日2012年04月18日、发明创造名称“兔源性纤维成分荧光定量PCR定性检测方法”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体的说，是一种兔源性纤维成分荧光定量PCR定性检测方法。

背景技术

兔毛、狐狸皮草是秋冬市场上的宠儿。皮草以其保暖、舒适、美观在国际市场上长盛不衰。除此以外，市场上还存在兔绒、狐绒织物制品。一般情况下，狐狸毛要比兔毛长密而柔软，加之饲养成本也较高，狐狸皮草的价格要远高于兔毛制品。近年随着品种的改良，兔毛也逐渐具备细长柔软的特性，比如安哥拉兔、獭兔等，给皮草的鉴别增加了难度。兔毛狐狸毛都有髓质层，极少数部分的细毛无毛髓，显微镜下呈现出小格状空腔。

我国现行的标准FZ/T01057-2007中对兔毛纤维的纵面形态描述为“鳞片较小与纤维纵向呈倾斜状，髓腔有单列、双列、多列”，有经验的人根据髓腔的排列和形状可以对纤维的种属进行判别。一般检测机构主要根据显微镜下的纤维形态特征来判断纤维的种属，见图1。图1为显微镜下的兔毛（左）和狐狸毛（右）。而在一般的光学显微镜下，鳞片并不是很清晰，检测起来费时费力。

发明内容

本发明是一种基于物种自带的DNA序列来定性判别兔毛狐狸毛的方法，以克服现有技术所存在的上述缺点和不足。

本发明的目的在于，提供一种兔源性纤维成分荧光定量PCR的定性检测方法。

本发明的另一目的在于，提供一种兔源性纤维成分的检测试剂盒，以及试剂盒的用途。

本发明的再一目的在于，提供一种兔源性纤维成分荧光定量PCR的引物和探针。

本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：

作为本发明的第一方面，一种兔源性纤维成分荧光定量PCR的定性检测方法，包括以下步骤：

步骤一、以兔毛的DNA为模板，进行PCR扩增；

步骤二、检测扩增产物的荧光信号；

其特征在于，用于PCR扩增的反应体系中含有扩增兔源性纤维成分特异性引物对和兔源性纤维成分特异性探针。

其中，所述扩增兔源性纤维成分特异性引物对的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

其中，所述兔源性纤维成分特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

其中，所述方法还包括步骤：在聚合酶链式反应过程中或之后，检测兔源性纤维成分特异性探针发出的荧光信号。

所述PCR扩增的条件如下：

反应体系：ABI Taqman universal PCR master mix(2×)10μl，DNA模板2μl，引物1.2μl（10μM），probe2μl（2μM），ddH₂O4.8μl；

反应的条件为：95℃，5min；95℃，15s，61℃，45s，40个循环。

作为本发明的第二方面，一种兔源性纤维成分的检测试剂盒，含有以下试剂：

（a）扩增兔源性纤维成分特异性引物对；

（b）兔源性纤维成分特异性探针。

进一步，所述试剂盒还包括：

（c）标准参照物。

其中，所述标准参照物是兔源性纤维成分DNA，或含有兔源性纤维成分扩增目的片段的质粒DNA，或兔毛。

其中，所述扩增兔源性纤维成分特异性引物对的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

其中，所述兔源性纤维成分特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

其中，所述兔源性纤维成分特异性探针发出的荧光信号。

作为本发明的第三方面，一种兔源性纤维成分的检测试剂盒的应用，用于检测在皮草中是否存在兔源性纤维成分。

作为本发明的第四方面，一种如权利要求1所述的兔源性纤维成分荧光定量PCR的特异性引物和特异性探针，其特征在于，

所述兔源性纤维成分特异性引物的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；

所述兔源性纤维成分特异性探针的序列如SEQ ID NO：3所示。

本发明的有益效果：

1、可简便、快速的检测和鉴定皮草中是否存在兔源性、狐源性纤维成分。

2、本发明基于兔和狐的线粒体12SrRNA基因的序列，设计特异性引物和特异性探针的特异性好。